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应用生物膜干涉技术测定治疗性单抗与新生儿Fc受体的亲和力
目的:建立基于生物膜干涉(Biolayer interferometry,BLI)技术检测治疗性单抗与新生儿Fc受体(neonatal Fc receptor,FcRn)亲和力的方法.方法:链霉亲和素(streptavidin,SA)偶联传感器结合生物素标记FcRn后,使用稀释液(0.1％ BSA/0.05％ Tween20/PBS,pH 6.0)封闭传感器后采用BLI方法检测,以稀释液1∶2系列稀释样品(浓度范围为125 ～ 16 000 nmol·L-1),空白对照采用未结合FcRn的传感器检测上述系列稀释样品.结果采用Steady state analysis方式拟合,计算样品平衡常数(KD)值,计算样品各自的95％可信区间(confidence interval,CI),对不同抗体与FcRn的亲和力进行比较.结果:IgG-FcRn结合曲线呈现明显的快结合-快解离形态.应用建立的方法检测不同单抗与FcRn的亲和力结果:bevacizumab与FcRn的亲和力较trastuzumab高95％,存在显著性差异;bevacizumab生物类似药(similar biotherapeutic products,SBP)-1与FcRn亲和力较原研药(reference biotherapeutic products,RBP)有32％的升高,且有显著性差异.其他Cys-偶联药物前后、Lys-偶联药物前后、表达细胞系由SP2/0更换为CHO均未对IgG-FcRn亲和力产生影响.结论:建立了优化的基于生物膜干涉技术检测IgG抗体与FcRn亲和力测定方法,可用于单抗及抗体偶联药物与FcRn亲和力的评价.
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肽类或蛋白质类药物体内稳定性控制策略
肽类或蛋白质类药物具有生物活性和特异性较高、可溶性强、低毒性等优点,现已成为药物研发的热点领域;然而,肽类或蛋白质类药物由于消化系统和血液中蛋白酶的快速降解以及体内肾脏的快速清除,体内半衰期一般较短,严重限制了药效作用的发挥.为了延长肽类或蛋白质类药物的体内半衰期,改善其药代动力学和药效学特征,各药物研发机构已进行大量研究,并成功开发多种化学修饰或基因工程改造方法.该文将主要从提高对酶的稳定性、增大流体力学体积和FcRn介导的pH依赖的再生等方面探讨延长肽类或蛋白质类药物半衰期的策略,并对成功的药物研发实例进行归纳汇总.
