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共载多柔比星和siRNA的还原敏感性纳米粒的体外靶向性评价
本研究构建了一种透明质酸(hyaluronic acid,HA)修饰的共载多柔比星(doxorubicin,DOX)和siRNA的还原敏感性纳米粒(nanoparticles,NPs),并对其体外肺癌靶向性进行评价.经酰胺化反应合成载体材料多聚L-赖氨酸-硫辛酸聚合物(PLA)并进行核磁表征.通过透析法和静电吸附法制备共载DOX与siRNA的NPs并以HA对其修饰,得到HA-PLA/DOX-siRNA-NPs;以粒径和zeta电位为指标,考察HA-PLA/DOX-siRNA-NPs的肿瘤微环境响应性;以人源性非小细胞肺癌细胞(A549)为体外模型,通过CLSM考察HA-PLA/DOX-siRNAFAM-NPs的细胞摄取与siRNA的内涵体逃逸.1HNMR结果显示,载体材料PLA成功合成,LA的接枝率为25.1％;体外表征结果显示,HA-PLA/DOX-NPs的包封率和载药量分别为(86.93±8.91)％和(4.17±0.68)％,在载体中氮磷比(N/P)为6∶1时能完全吸附siRNA;HA-PLA/DOX-siRNA-NPs的粒径为(167.3 ±9.9) nm,电荷为(-15.5±1.4) mV;在透明质酸酶(HAase)环境中zeta电位由负转正,而在10 mmol·L-1谷胱甘肽(GSH)环境中粒径分布变乱;体外释放结果表明,HA-PLA/DOX-NPs在pH 7.4下释药缓慢,而在10 mmol·L-1 GSH环境中能够快速释药.细胞摄取及分布实验表明,HA的包覆能够增强NPs的细胞亲和性和靶向性,且采用HAase处理后,HA-PLA/DOX-siRNAFAM-NPs组的细胞摄取增强;且摄入后能有效从内涵体逃逸,快速释放药物和siRNA至其各自的靶点.结果提示:HA-PLA/DOX-siRNAFAM-NPs对DOX和siRNA均具有较高的包载效率,能显著提高其肿瘤细胞靶向性,并具有肿瘤微环境响应特征,有作为基因与药物共递送体系的潜能.
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还原敏感性中间体R-ss-COOH的合成
目的 合成一系列含二硫键的中间体,以用于后期制备具有还原敏感性、两亲性的纳米载体材料.方法 以3,3’-二硫代二丙酸(DTDP)、脂肪醇为原料,碳二亚胺类为失水剂,在4-二.甲氨基吡啶(DMAP)催化下,DTDP一端的—COOH与脂肪醇的—OH发生酯化反应合成3,3’-二硫代二丙酸脂肪醇单酯(R-ss-COOH),产物经柱色谱分离纯化,并用FT-IR和1 H-NMR、MS进行结构确证.结果 与DCC/DMAP催化体系相比,EDCI/DMAP催化体系所得反应液澄清,副产物易于除尽.经FT-IR、1 H-NMR、MS确证,成功合成了不同碳链的还原敏感性中间体C14-ss-COOH、C16-ss-COOH和C1s-ss-COOH.结论 应用EDCI/DMAP催化体系合成R-ss-COOH的方法易于操作,相对简单.合成的系列R-ss-COOH可作为中间体,用于制备还原敏感型两亲性聚合物纳米材料.
关键词： 还原敏感性 3 3’-二硫代二丙酸脂肪醇单酯 二硫键 碳二亚胺类
