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新型海藻糖衍生物的设计、合成及活性研究
以brartemicin为先导化合物设计合成了15个新型海藻糖衍生物,并通过1H NMR、MS及元素分析确证了其结构.采用MTT法考察目标化合物对肿瘤细胞HepG2、A549和正常细胞HUVEC增殖的影响;采用Matrigel黏附实验,Transwell小室法考察目标化合物对HepG2和A549细胞黏附、侵袭与迁移能力的影响.结果表明,在1～32 μmol·L-1浓度内,15个目标物对HepG2、A549和HUVEC细胞均无显著细胞毒性(P＞0.05).在上述浓度范围内,化合物79和82对A549细胞黏附、侵袭与迁移的抑制作用以及对HepG2细胞的黏附与侵袭抑制作用,均优于阳性对照brartemicin.
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沉默GRP78／BIP表达对人膀胱癌T24细胞侵袭及迁移的影响及机制
目的：探讨体外沉默葡萄糖调节蛋白GRP78／BIP表达对膀胱癌T24细胞侵袭及迁移的影响及可能机制。方法：设计、合成靶向GRP78基因的小干扰RNA，利用脂质体Liopfecta mineRNAIMAX转染入膀胱癌T24细胞，分别采用Real-time PCR、Western blot在mRNA和蛋白水平检测细胞内GRP78、MMP2、MMP9、Timp-2表达，采用Transwell实验及细胞划痕实验检测沉默GRP78表达对膀胱癌T24细胞侵袭及迁移的影响。结果：实验（ siRNA-GRP78） T24细胞中GRP78表达显著降低，细胞侵袭迁移能力明显受到抑制，MMP2、MMP9表达降低，而Timp-2表达增高，差异均有统计学意义（ P＜0.05）。结论：沉默GRP78能明显抑制人膀胱癌细胞的侵袭、迁移能力，其机制可能与影响MMP2、MMP9、Timp-2表达相关。
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慢病毒构建的细胞系中过表达FRK对人脑胶质瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响
目的:探讨在慢病毒构建的稳定表达酪氨酸相关激酶(fyn-related kinase,FRK)的细胞系中,过表达FRK对人脑胶质瘤细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响.方法:1.将FRK慢病毒质粒与辅助质粒共转染293T细胞进行慢病毒包装,然后用包装好的慢病毒感染胶质瘤U251、U87细胞,建立稳定表达FRK的细胞系,同时运用Western blotting(WB)技术检测FRK在U251、U87细胞系中的过表达情况;2.细胞划痕实验与Transwell迁移实验检测过表达FRK对脑胶质瘤细胞迁移能力的影响;3Transwell侵袭实验检测过表达FRK对脑胶质瘤细胞侵袭能力的影响;4.EdU实验与平板集落形成实验检测过表达FRK对脑胶质瘤细胞增殖能力的影响.结果:1.荧光显微镜下可见慢病毒感染U251、U87细胞的效率达到90％以上,WB结果显示外源性FRK蛋白在U251、U87细胞系中充分表达;2.细胞划痕实验显示:与空载体组相比,过表达FRK组U251细胞迁移的细胞数在24h和48 h分别减少了(50.00±1.04)％和(44.14±7.05)％,差异有统计学意义(P＜0.01);而过表达FRK组U87细胞迁移的细胞数在24 h和48 h分别减少了(58.50±4.12)％和(44.67±3.82)％ (P ＜0.001);3.Transwell迁移实验显示:与空载体组相比,过表达FRK组U251、U87细胞穿过滤膜的细胞数分别减少了(67.76±4.88)％和(50.76±4.54)％ (P ＜0.001);4.Transwell侵袭实验显示:与空载体组相比,过表达FRK组U251、U87细胞穿过Matrigel基质胶及滤膜的细胞数分别减少了(50.94±4.83)％和(57.92±6.19)％ (P ＜0.001);5.EdU实验显示:与空载体组相比,过表达FRK组U251、U87细胞的EdU阳性细胞率分别下降了(28.06±4.31)％和(33.51±7.26)％(P＜0.01);6.平板集落形成实验结果显示:与空载体组相比,过表达FRK组U251、U87细胞集落形成分别减少了(35.94±6.76)％与(52.33±7.42)％(P＜0.01).结论:过表达FRK可以抑制脑胶质瘤细胞的增殖,并且可以抑制胶质瘤细胞的侵袭和迁移能力.
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Survivin基因沉默抑制食管癌Eca-109细胞的侵袭与迁移
目的 应用RNA干扰(RNAi)技术沉默食管癌细胞Eca-109内源性survivin的表达,探讨survivin基因在食管癌细胞侵袭与迁移过程中的作用.方法 构建靶向survivin基因的siRNA表达载体并借助脂质体稳定转染食管癌细胞;Western blot检测survivin蛋白表达水平观察基因沉默效果,同法观察细胞内基质金属蛋白酶-2(MMP2)、基质金属蛋白酶-9(MMP9)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白水平的变化;Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化,细胞划痕实验观察细胞迁移能力的改变.结果 与对照组相比,干扰组survivin蛋白表达水平明显降低,抑制率可达85％;干扰组细胞MMP2、MMP9和VEGF蛋白表达受到明显抑制(P＜0.05),同时观察到干扰组细胞的侵袭与迁移能力也明显下降(P＜0.05).结论 survivin基因与食管癌细胞的侵袭迁移潜能相关,特异性沉默survivin基因可能通过下调MMP2、MMP9和VEGF的表达显著抑制食管癌细胞Eca-109的侵袭与迁移能力.
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长链非编码RNA FAL1对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭与迁移的影响
目的：探索人宫颈癌细胞Hela与正常人宫颈永生化上皮细胞H8中长链非编码RNA FAL1分子的表达差异及沉默人宫颈癌细胞Hela中FAL1的表达对人宫颈癌细胞Hela增殖、侵袭和迁移的影响。方法：利用qRT-PCR技术检测细胞中FAL1基因表达水平；设计并合成FAL1的siRNA片段（ FAL1-siRNA）转染宫颈癌Hela细胞，qRT-PCR技术检测其沉默效率；MTT检测人宫颈癌细胞Hela增殖；Tramswell实验检测人宫颈癌细胞Hela的侵袭、迁移能力的变化。结果：长链非编码RNA FAL1在人宫颈癌细胞Hela中的表达明显高于正常人宫颈永生化上皮细胞H8中的表达，FAL1-siRNA下调了Hela细胞中FAL1的表达，并抑制了宫颈癌细胞Hela的增殖和侵袭迁移能力。结论：FAL1-siRNA能够下调Hela细胞FAL1的表达，进而抑制人宫颈癌细胞Hela的增殖及其侵袭迁移能力，提示长链非编码RNA FAL1在宫颈癌中是一种癌基因，FAL1的表达异常增高可能是宫颈癌发生发展的重要分子机制。
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14-3-3ζ、S100A8在膀胱癌中的表达及与膀胱癌侵袭和迁移的关系
目的:观察膀胱癌组织中14-3-3ζ、S100A8的表达变化,分析其与膀胱癌侵袭和迁移关系,并探讨其临床意义.方法:免疫组织化学法检测90例膀胱癌组织及癌旁组织中14-3-3ζ、S100A8的表达.图像分析技术分析两个指标在膀胱癌中的阳性表达率,并分析其与临床分期、病理分级的关系.结果:膀胱癌组织中14-3-3ζ、S100A8的阳性表达率为65.56%、54.44%,癌旁正常组织中分别为10%、0%,与癌旁正常组织相比,癌组织中的阳性表达率差异均有统计学意义(P<0.05).14-3-3ζ、S100A8的表达均与膀胱癌的分化程度、临床分期、淋巴结迁移、复发性等有关(P<0.05).结论:14-3-3ζ、S100A8在膀胱癌组织中异常表达与膀胱癌的侵袭和迁移有高度相关性.14-3-3ζ、S100A8检测可以有效应用于膀胱癌的检测、预后判断.
