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重组人组织激肽释放酶结合蛋白的高密度毕赤酵母表达、纯化和生物学活性
研究重组人组织激肽释放酶结合蛋白(rHKal)的高密度毕赤酵母表达、纯化以及生物学活性.以质粒pPIC9-Kal/GS1 15 (His4)转化毕赤酵母细胞,在7.5L培养罐内高密度细胞发酵,以1％～2％的甲醇诱导表达rHKal.发酵上清液经疏水层析、亲和层析和凝胶层析分离rHKal.通过MTT及小管形成实验评价rHKal对HUVEC的生物学活性.收获发酵上清液内rHKal的表达水平为50 mg·L-1,纯化后rHKal原液的纯度达98％以上.rHKal对HUVEC的增殖抑制活性呈剂量依赖性,但对其小管形成抑制作用的量效关系呈U型曲线.rHKal 具有新生血管形成抑制活性,本研究为rHKal的生产提供了有效方法.
关键词： 组织激肽释放酶结合蛋白 高密度发酵 纯化 生物学活性 -
Kallistatin通过Akt-eNOS信号通路对肝星状细胞氧化损伤的保护作用
为揭示kallistatin对肝星状细胞氧化损伤的保护作用及相关分子机制,本文以过氧化氢和铁过载为氧化模型,以大鼠原代肝星状细胞及完全活化的人肝星状细胞系LX-2为对象,研究了kallistatin在对肝星状细胞活力、超氧化物、NADPH和Akt、eNOS等分子的影响.实验结果显示,kallistatin既能避免肝星状细胞受氧化损伤,还能修复氧化应激造成的细胞损伤;其主要机制为kallistatin能清除细胞内的超氧化物、降低细胞内NADPH 活力;另外,kallistatin还能激活Akt和eNOS等分子发挥抗氧化作用.本研究为加速肝纤维化药物新靶点开发提供了理论依据.
关键词： 组织激肽释放酶结合蛋白 肝星状细胞 氧化损伤 肝纤维化 -
质粒介导的组织激肽释放酶结合蛋白在肺癌相关细胞内的表达及其生物学活性研究
研究裸质粒能否转染肺癌相关细胞,且有效表达具有血管形成抑制活性的组织激肽释放酶结合蛋白(Kal),以及Kal的表达对体内外肺癌及相关细胞的生物学影响.采用Lipofectamine 2000介导质粒对肺癌相关细胞的转染,ELISA法检测Kal浓度,并考察Kal对细胞增殖、凋亡和迁移的影响.瘤内直接注射质粒后,观察NCI-H446皮下移植瘤内CD34、Ki-67和E-钙黏蛋白水平变化,以及肿瘤细胞凋亡的情况.转染质粒后,所有受试细胞均可表达Kal,其中HUVEC的增殖和迁移受到抑制;3种肺癌细胞NCI-H446、NCI-H460和A549的增殖被不同程度地抑制,并出现凋亡现象.体内研究显示,Kal可以抑制新生血管生成及肿瘤细胞增殖,肿瘤生长速度显著降低.因此,可介导Kal表达的裸质粒可以作为肺癌治疗的候选药物.
关键词： 基因治疗 载体 组织激肽释放酶结合蛋白 新生血管形成 肺癌
