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PprI蛋白质文献资料
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耐辐射奇球菌PprI蛋白质在毕赤酵母菌中的高效表达及纯化
目的 利用真核毕赤酵母高效表达原核的耐辐射奇球菌pprI基因,建立高效表达及纯化PprI蛋白质的技术路线.方法 根据毕赤酵母密码子的偏爱性,改造耐辐射奇球菌pprI基因的编码序列,利用PCR技术全合成改造过的pprI基因,并在其N末端添加一个6×His标签.PCR产物经纯化后克隆到毕赤酵母表达载体pHBM-905A中,利用Cop 1和Not I双酶切并回收线性化的目的片段后,转化毕赤酵母GS115菌株.将获得的毕赤酵母转化子诱导表达,SDS-PAGE、Western blot和质谱检测培养上清液,用Ni-NTA柱纯化目的蛋白,BCA法测定蛋白浓度.结果 新合成的耐辐射奇球菌pprI基因编码序列正确,毕赤酵母转化菌株的培养上清液经SDS-PAGE和Western blot均可检测到相对分子质量为43 000的目的蛋白条带,经质谱检测证实该目的蛋白为耐辐射奇球菌PprI蛋白.选用Ni-NTA柱获得了大量纯化的PprI蛋白,应用浓度为250 mmol/L的咪唑淋洗时,PprI蛋白洗脱率高.BCA法测得纯化蛋白浓度为0.35 mg/ml.结论 建立了一种新的适于毕赤酵母表达的耐辐射奇球菌pprI基因,成功构建了分泌表达Pprl蛋白质的重组毕赤酵母工程菌株,建立了高效表达目的蛋白的技术路线,并获得了高效表达和纯化的PprI蛋白.
