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miRNA-95在宫颈癌放疗敏感性中的作用及其机制研究
目的 研究miRNA-95在不同放射敏感性的宫颈癌患者肿瘤组织和宫颈癌细胞株中的表达情况及其调控表达后对宫颈癌细胞放射敏感性的影响.方法 分别利用Real-time PCR方法检测放疗敏感患者组20例、 放疗耐受患者组20例的宫颈癌肿瘤组织和辐射抵抗宫颈癌细胞株(HeLa、SiHa)、辐射敏感宫颈癌细胞株(Me180)中miRNA-95的表达情况.利用脂质体2000将miRNA-95 mimics和miRNA-95 inhibitions转染至辐射抵抗的HeLa、SiHa细胞中,分别为miRNA-95mimics组和miRNA-95 inhibition组,同时设置miRNA-NC组为对照.CCk-8方法检测在0、2、4、6、8、10 Gy剂量60 Coγ射线照射下各组宫颈癌细胞的增殖情况;平板单克隆实验检测4 Gy照射后各组宫颈癌细胞单克隆形成能力;流式细胞术检测4 Gy照射后各组宫颈癌细胞凋亡变化;双荧光素酶活性实验检测miRNA-95在宫颈癌细胞中的靶向基因;裸鼠实验检测4 Gy照射后各组宫颈癌裸鼠成瘤的变化.结果 miRNA-95在放疗耐受患者组宫颈癌肿瘤组织中表达显著高于放疗敏感组(t=12.279,P<0.05);miRNA-95在HeLa、SiHa细胞中表达量显著,与Me180细胞比较,差异有统计学意义(t=5.162、7.114,P<0.05);与miRNA-NC组相比,miRNA-95 inhibition组HeLa、SiHa细胞株中miRNA-95表达水平显著下降(t=9.284、8.036,P<0.05),而细胞增殖率显著下降(t=8.273、11.354、13.489、15.396和6.197、9.185、10.994、12.442,P<0.05);单克隆形成率显著下降(t=8.378、7.931,P<0.05);细胞凋亡率显著上升(t=10.265、8.386,P<0.05);miRNA-95 inhibition组裸鼠成瘤重量显著降低(t=8.881、10.037,P<0.05).结论 miRNA-95在放疗敏感的宫颈癌肿瘤组织和辐照敏感的宫颈癌细胞中均呈低表达,而抑制miRNA-95表达水平能够显著提高宫颈癌细胞的辐射敏感性,并通过靶向SGPP1基因从而发挥作用.
