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敲低长链基因间非编码RNA-p21对乏氧肿瘤细胞放射敏感性的影响
目的 探讨敲低长链基因间非编码RNA-p21(lincRNA-p21)对乏氧肿瘤细胞放射敏感性的影响及机制.方法 实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测人肝癌细胞SMMC7721和脑胶质瘤细胞U251 MG乏氧培养不同时间lincRNA-p21的表达.构建lincRNA-p21 siRNA慢病毒载体,经慢病毒转染建立稳定敲低lincRNA-p21的SMMC7721和U251MG细胞系.流式细胞术检测乏氧肿瘤细胞周期和凋亡.克隆形成实验检测乏氧肿瘤细胞放射敏感性.Western blot检测乏氧诱导因子1α(HIF-1α)和GLUT1蛋白含量.结果 SMMC7721和U251MG细胞乏氧(1％O2)培养24和48 h,lincRNA-p21的表达随培养时间的增加逐渐升高.24和48 h与0h组相比,lincRNA-p21表达明显升高(t=5.13、7.49、8.90、10.11,P＜0.05).稳定转染lincRNA-p21 siRNA下调乏氧肿瘤细胞中lincRNA-p21的表达(t=144.81、334.32,P＜0.05).乏氧(1％O2)培养48 h,敲低lincRNA-p21细胞SMMC7721和U251 MG发生C2/M期阻滞(=7.05、10.18,P＜0.05);细胞凋亡明显增加(t=42.27、24.79,P ＜0.05);HIF-1α和GLUT1蛋白含量减少,放射敏感性增强,放射增敏比(SER)约为1.23、1.31.结论 乏氧促进肿瘤细胞中lincRNA-p21表达.敲低lincRNA-p21增强乏氧肿瘤细胞放射敏感性,其机制可能与敲低lincRNA-p21诱导细胞G2/M期阻滞和细胞凋亡,并导致HIF-1α蛋白水平下降有关.
关键词： lincRNA-p21 乏氧 细胞周期 细胞凋亡 放射敏感性 -
lincRNA-p21抑制肾癌细胞增殖作用
目的 探讨lincRNA-p21对肾癌细胞增殖作用的影响.方法 收集17例重庆市第七人民医院内分泌肾病科肾癌患者的组织样本,利用RT-PCR检测肾癌及其癌旁组织中lincRNA-p21的表达水平及人肾癌细胞系786-O、人胚肾细胞系HEK-293细胞中lincRNA-p21的表达水平,用siRNA降低lincRNA-p21的表达后观察其对细胞增殖、凋亡情况的影响以及对Bax、Noxa、Puma等p53信号通路中癌症相关基因表达水平的影响.结果 在肾癌患者的癌灶组织中,lincRNA-p21的表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.05),786-O较HEK-293细胞lincRNA-p21 mRNA表达水平显著升高(P＜0.05);用siRNA降低lincRNA-p21的表达后发现786-O细胞增殖增强,凋亡减弱,并且Bax、Noxa、Puma等癌症相关基因表达水平也被抑制(P＜0.05).结论 lincRNA-p21可能通过参与p53信号通路的转导,对肾癌细胞的增殖起到抑制作用,提示lincRNA-p21可作为分子靶点用于肾癌的靶向治疗.
关键词： lincRNA-p21 肾癌增殖 P53 -
LincRNA-p21抑制食管癌细胞增殖的机制
[目的]探讨基因间的长链非编码RNA(long intergenic non-coding RNA,LincRNA)-p21抑制食管癌细胞增殖的调控及机制.[方法]应用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)技术,检测LincRNA-p21在2株食管癌细胞(EC109和EC9706)与1株永生化食管上皮细胞(Het-1A)以及64例食管癌组织与癌旁组织中的表达情况.携带LincRNA-p21基因全长的慢病毒成功转染食管癌EC109后,通过流式细胞术检测食管癌细胞EC109的周期分布,EdU染色法分析EC109的增殖情况.同时,采用RT-qPCR和Western blot技术分别检测LincRNA-p21下游基因p21的mRNA水平和蛋白表达水平,以及cyclin D蛋白水平.[结果] EC109和EC9706中LincRNA-p21水平分别为Het-1A的18％和32％(P＜0.05);p21的mRNA水平分别为Het-1A的42％和48％.以EC109为靶细胞进行慢病毒转染后,LincRNA-p21相对表达量增加约14860倍(P＜0.05),p21的mRNA上调约1.83倍(P＜0.05).细胞周期分布结果显示,LincRNA-p21转染组其G1期细胞增加,S期和G2期细胞减少(P＜0.05),增殖指数(40.4％)低于阴性对照(48.2％)(P＜0.05).EdU增殖分析结果显示上调LincRNA-p21后,细胞增值率明显降低.Western blot结果显示过表达LincRNA-p21下调cyclin D蛋白水平.[结论] LincRNA-p21促进p21表达,通过抑制cyclinD表达从而诱导食管癌EC109细胞G1/S期阻滞,抑制细胞增殖.
关键词： 食管癌 长链非编码RNA lincRNA-p21 p21 G1/S阻滞 -
长链非编码RNA-p21诱导细胞凋亡在动脉粥样硬化中的作用
目的:探讨lincRNA-p21通过调控细胞凋亡参与冠心病的发生发展过程,及其对动脉粥样硬化的影响.方法:选取我院50例冠心病患者,用ElISA方法检测患者血清中lincRNA-p21含量和凋亡蛋白Bcl-2含量.提取大鼠心肌内皮细胞制备大鼠动脉硬化模型,过表达或抑制lincRNA-p21后,CCK-8法检测细胞存活率;构建lincRNA-p21质粒注射进入小鼠颈动脉损伤模型,HE染色观察小鼠颈动脉内膜新生.Caspase-3活性检测试剂盒检测内皮细胞凋亡蛋白Caspase-3活性;Western blot法检测凋亡蛋白Bcl-2和BAX蛋白表达水平.结果:冠心病患者血清内lincRNA-p21表达显著下降,差异有统计学意义(P<0.05).大鼠原代内皮细胞中过表达lincRNA-p21显著降低细胞存活率,显著上升Caspase-3活性,显著增加BAX表达,显著下降BCL-2表达;lincRNA-p21抑制组细胞存活率明显增高,Caspase 3活性显著下降,促凋亡蛋白BAX水平显著降低,抗凋亡蛋白BCL-2水平显著增加,差异有统计学意义(P<0.05).小鼠体内局部沉默lincRNA-p21后,血管内/中膜厚度比明显增加,Caspase-3活性明显降低,Bcl-2蛋白表达增加且BAX蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论:lincRNA-p21可通过调控细胞凋亡参与冠心病的发生发展过程.
关键词： lincRNA-p21 冠心病 细胞凋亡 Bcl-2
