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HIV-1 Tat 蛋白对细胞周期相关基因表达及辐射细胞周期阻滞的影响
目的:探讨HIV-1 Tat蛋白对细胞周期相关基因表达以及电离辐射诱发细胞周期阻滞的影响.方法:使用包含102个与DNA损伤修复和细胞周期相关的基因微阵列检测人横纹肌肉瘤细胞(TE671)及已转染tat基因的TE671细胞(TT2)基因表达谱的改变;使用流式细胞仪检测细胞周期变化;Western印迹检测蛋白表达变化.结果:在基因芯片的检测中发现,与DNA损伤修复及细胞周期调控相关的6个基因Cdc25C,KIF2C,Cdc20,DNA-PKcs,CTS1,Wee1在转染tat基因的细胞中表达下调;细胞周期检测发现TE671细胞和TT2细胞经4 Gy γ射线照射后表现出不同程度的G2/M期阻滞,但表达Tat的TT2细胞G2/M阻滞出现较TE671细胞晚,而在照射后48 h时TE671细胞G2/M期阻滞已恢复,但TT2细胞阻滞仍很显著.另外,TT2细胞S期阻滞时间延长.研究进一步发现细胞周期蛋白(cyclin)B1在TT2细胞中表达增强.结论:HIV-1Tat蛋白导致G2/M检验点功能紊乱,将影响细胞的辐射敏感性,本研究为了解AIDS合并肿瘤患者对放射治疗敏感性提供了重要实验数据.
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盐诱导激酶2对放射损伤后细胞周期检查点中的调节作用
目的 了解盐诱导激酶2(SIK2)在电离辐射诱发G2/M细胞周期阻滞中的作用,并探讨其作用机制.方法 60Coγ射线照射HeLa细胞,慢病毒载体(pSicoR)构建SIK2的小干扰RNA(shRNA)表达载体,Lipofectamine 2000介导转染构建SIK2敲低表达细胞模型.Western blot检测SIK2的蛋白表达含量,流式细胞术检测细胞周期,磷酸化组蛋白3(pH3 Ser10)作为流式细胞检测分子标记物分析G2/M期检测点功能.结果 γ射线照射能诱发HeLa细胞SIK2蛋白表达增加.成功构建shRNA敲低HeLa细胞SIK2表达的细胞模型,并通过该细胞模型观察到在不同剂量照射后(1、2、4、6 Gy)降低SIK2蛋白表达水平导致细胞的放射敏感性增高(t=-3.445、-2.581、-3.251、-2.553,P＜0.05),γ射线诱发的细胞周期G2/M边界阻滞在照后5、6h被提前解除(=4.341、6.500,P＜0.05).Western blot检测结果表明,SIK2敲低细胞与对照细胞相比,放射损伤诱发的磷酸化CHK2蛋白提前消退.结论 SIK2在细胞放射损伤反应中参与细胞的G2/M检查点功能的调节,影响细胞的放射敏感性.
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DADS活化HL-60细胞G2/M检查点与cyclinB1亚细胞分布的关系
目的 研究二烯丙基二硫(DADS)诱导人急性髓性白血病细胞系HL-60细胞G2/M期生长阻滞的分子机制. 方法 采用MTT 法检测DADS对细胞增殖活性的影响、流式细胞术检定细胞增殖周期、蛋白印迹法检测细胞内cyclinB1表达水平. 结果 DADS呈浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖活性,且DADS(20 μmol/L)与ATRA(10-6mol/L)对HL-60细胞增殖活性影响相近(P＜0.01),DADS(20 μmol/L)作用12 h后能引起G2/M期细胞百分数增高并达到大值,上调cyclinB1的表达水平并诱导cyclinB1细胞质定位. 结论 DADS能启动HL-60细胞G2/M检查点,它的激活与cyclinB1细胞质定位有关.
