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化疗诱导Egr-1启动子调控造血因子基因表达的实验研究
目的 探索化疗药物诱导Egr-1启动子调控GM-CSF基因表达对化疗后造血损伤的恢复作用.方法 将GM-CSF和EGFP双顺反子基因重组于携带Egr-1调控元件的pCIneo真核表达载体,构建Egr-EG载体,通过脂质体介导转染骨髓基质细胞HF-CL,即获得HFCL/EG细胞.MITT法测定顺铂(DDP)、氟尿嘧啶(5-FU)、吉西他滨(GEM)和紫杉醇(PTX)对HFCL和HFCL/EG细胞存活率的影响,并计算各药物对细胞的IC50值.倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测化疗药物诱导后绿色荧光蛋白(EGFP)表达阳性的HFCL/EG细胞百分率.ELISA法检测活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对化疗药物诱导的Fgr-1启动子调控的下游GM-CSF基因表达的影响.观察化疗诱导后HFCL/EG上清对粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)的影响.结果 成功构建了Egr-Eg载体,其转染细胞HFCL/EG细胞对DDP、5-FU、GEM和PTX有不同的敏感性,且药物对HFCL/EG细胞IC50值均较HFCL组明显增加(P＜0.05).流式细胞仪检测显示DDP、5-FU、GEM和PTX均可以诱导调控Egr-1启动子调控的EGFP表达,HFCL/EG+DDP组、HFCL/EG+5-FU组、HFCL/EG+GEM组、HECL/EG+PTX组绿色荧光阳性的细胞百分率分别为35.06%±0.61%、65.12%±1.10%、44.47%±0.71%、37.56%±0.63%,与HFCL/EG组(10.02%±0.21%)相比明显增加(P＜0.05).化疗药物处理后,HFCL/EG细胞培养上清液中,GM-CSF含量和CFU-GM形成数量较未化疗组明显增高(P＜0.05);但加入活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸后,培养上清中GM-CSF含量明显减少(P＜0.05).结论 化疗药物诱导的Egr-1启动子调控下游基因表达与活性氧相关,且Egr-1启动子调控的造血生长因子基因表达可能对化疗后的造血损伤具有一定的保护作用.
关键词： Egr-1蛋白 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 造血干细胞 活性氧 -
EGR-1蛋白在人肺鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义
目的:检测早期生长反应基因-1(early growth response gene-1,EGR-1)蛋白在肺鳞状细胞癌组织中的表达,探讨EGR-1蛋白表达与患者临床病理指标及预后的相关性.方法:收集2007年1月至2007年12月山东大学齐鲁医院肺鳞状细胞癌83例患者癌组织和癌旁肺组织标本,采用免疫组化SP法检测癌组织和癌旁肺组织中EGR-1蛋白的表达水平.分析EGR-1蛋白表达与患者临床病理指标之间的关系,Kaplan-Meier法计算患者的5年生存率,Log-rank法检验比较患者的生存差别,Cox回归多因素分析判定独立的预后因素.结果:EGR-1蛋白在肺鳞状细胞癌组织中的表达水平显著低于癌旁肺组织[(4.12±0.35) vs (6.90±4.58),P＜0.01]；EGR-1蛋白低表达与患者年龄(P =0.912)、性别(P =0.429)及肿瘤细胞分化程度(P =0.289)均无显著相关性,与吸烟史(P=0.025)、肿瘤大小(P=0.013)、淋巴结转移(P=0.003)及TNM分期(P=0.028)显著相关.EGR-1蛋白低表达的患者,其术后5年总生存率显著低于EGR-1蛋白高表达的患者(2.6％ vs 15.9％,P=0.04)；TNM分期(P=0.020)、EGR-1蛋白低表达(P=0.035)是判定肺鳞状细胞癌患者预后的独立因素.结论:EGR-1蛋白在肺鳞状细胞癌组织中存在低表达,且与肿瘤进展及患者预后密切相关.
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Egr-1蛋白、MMP-2、TGF-β1在肾小管间质纤维化大鼠中的表达及意义
目的 探讨Egr-1(early growth response-1)蛋白、MMP-2、TGF-β1在肾小管间质纤维化大鼠模型中的表达及意义.方法 采用单侧输尿管结扎术(Unilateral Ureteral Obstruction,UUO)致肾小管间质纤维化大鼠模型.将54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、贝那普利(Benazepril)治疗组[10 mg/(kg·d)].手术后第5、10和15天分别处死各组中6只大鼠,用免疫组化方法观察各组大鼠肾小管间质中Egr-1蛋白,转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1),基质金属蛋白酶-2(matrix metalloProteinase-2,MMP-2)表达情况.行HE、Masson染色后进行图像分析评定各组肾小管间质损害程度.结果 模型组各时间点肾小管间质损伤指数及Egr-1蛋白、TGF-β1表达明显高于假手术组(P＜0.05),MMP-2表达明显低于同期假手术组(P＜0.05)；而贝那普利组各时间点肾小管间质损伤指数及Egr-1蛋白、TGF-β1表达明显低于模型组(P＜0.05),MMP-2表达明显高于同期模型组(P＜0.05).结论 Egr-1蛋白参与肾小管间质纤维化过程；贝那普利在肾小管间质纤维化中对肾脏有保护作用.
