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喉癌组织中DNA修复基因O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶启动子区过甲基化研究
目的 O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine DNA methyltransferase,MGMT)在烷化剂所致DNA损伤的修复中起重要作用,启动子区过甲基化而导致MGMT基因的转录失活.本文探索了喉癌中MGMT基因启动子区过甲基化状态及其mRNA表达情况.方法采用甲基化特异性聚合酶链反应及半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法分析喉癌、癌旁和正常喉部组织中MGMT基因启动子区过甲基化状态及其mRNA表达情况.结果 46例喉癌组织中有16例(34.8%)MGMT基因启动子过甲基化,相应的癌旁及正常组织中均无甲基化.MGMT基因甲基化在不同的病理分级(χ2=3.130,P=0.077)和临床TNM分期(χ2=3.957,P=0.138)中差异无显著性.所有甲基化的癌组织中均无MGMT mRNA表达,而所有非甲基化的癌组织、相应癌旁组织和5例正常组织中均有MGMT mRNA表达.且非甲基化的癌组织中MGMT mRNA表达较癌旁组织(t=30.540,P＜0.01)和正常组织(t=31.882,P＜0.01)强,而癌旁和正常组织之间差异无显著性(t=0.419,P=0.677).结论喉癌中MGMT基因启动子区过甲基化与其转录失活有关.
关键词： 喉肿瘤 O(6)-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶 RNA 信使 -
替莫唑胺改变人胶质瘤细胞系U251耐药机制的体外研究
目的 建立替莫唑胺耐药人胶质瘤细胞系,探讨其耐药性变化规律及耐药机制,以期为临床优化药物化疗方案提供理论依据.方法 采用分步诱导法使人胶质瘤细胞系U251对替莫唑胺耐药,磺酰罗丹明B比色法检测细胞耐药指数和存活率;Western blotting法检测O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)表达水平,以及倍增替莫唑胺终浓度后MGMT表达水平.结果 成功建立替莫唑胺耐药U251/TR细胞,在替莫唑胺初始诱导剂量0.25μg/ml、终浓度16.00μg/ml培养液中,U251/TR细胞半数抑制浓度为(220.87±2.34)μmol/L,约为U251细胞[(33.12±1.52)μmol/L]的7倍(t=-116.542,P=0.000),其耐药指数约为7;U251/TR细胞MGMT表达水平为(1.47±0.30),较U251细胞(0.19±0.03)明显升高(t=-20.230,P=0.000).与溶媒对照组比较,经倍增替莫唑胺终浓度诱导的U251/TR细胞仍呈现增殖抑制现象,以体外培养第3天时为明显(P=0.000);MGMT表达水平相应降低(均P=0.000),呈现自身克服耐药现象.结论 采用分步诱导法可于体外成功建立替莫唑胺耐药人胶质瘤细胞系.MGMT表达水平升高是导致U251/TR细胞对替莫唑胺耐药的主要机制,替莫唑胺可以通过自身消耗MGMT而改变U251/TR细胞的耐药特性,发挥抗耐药作用.
