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囊泡单胺类转运体抑制触发的多巴胺的内源性毒性及其作用途径
本实验将囊泡单胺类转运体(VMAT)保护作用学说与多巴胺(DA)内源性毒性学说结合起来,探讨VMAT功能抑制触发的多巴胺内源性毒性的作用途径.
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联合6-羟多巴胺及囊泡单胺类转运功能抑制对PC12细胞凋亡的影响及机制
目的 探讨6-羟多巴胺(6-OHDA)及囊泡单胺类转运体(VMAT)功能抑制对大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡的影响、线粒体膜电位及细胞内Ca2离子的改变.方法 阴性对照、6-OHDA(25、50、100、200 μmol/L)、VMAT功能抑制剂利血平(50、100、400、1 600 nmol/L)-6-OHDA(100 μmol/L)作用于PC12细胞,前两大组于小同时間点(0、12、24、36、48 h),后一大组于0、24 h用流式细胞仪检测细胞凋亡率,并用JC-1染色流式细胞仪定量测定线粒体膜电位(△ψm)变化,激光共聚焦显微镜通过荧光探针强度检测PC12细胞内Ca2+离子浓度.结果 加入不同浓度的6-OH-DA时PC12细胞凋亡随6-OHDA浓度增加显著上升,具有时間依赖性(P ＜0.001)PC12细胞△ψm降低比例随6-OHDA浓度增加而增加,并随作用时間的延长增加更加明显(P＜0.001);细胞内Ca2+离子浓度随6-OHDA浓度增加而升高,并随作用时间的延长浓度升高更加明显.加入利血平后,相应的细胞凋亡增多,细胞内△Ψm降低比例明显增加,Ca2+离子浓度升高,差异有统计学意义(P＜0.001) 结论 6-OHDA能诱导PC12细胞凋亡,并呈剂量及时间依赖性;其作用机制可能为诱导PC12细胞内△ψm的降低及钙离子超载,并呈剂量及时间依赖性;VMAT功能抑制进一步加重了6-OHDA的内源性毒性,引起△ψm的降低及钙离子超载加重,进一步加再细胞凋亡.
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囊泡单胺类转运体功能抑制对PC12细胞的毒性及抗氧化剂的干预
目的:研究囊泡单胺类转运体(VMAT)功能抑制对大鼠嗜铬瘤(PC12)细胞产生的内源性毒性及抗氧化剂的保护作用.方法:用流式细胞仪观察VMAT功能抑制以及不同干预方法对PC12细胞存活的影响和细胞死亡方式.结果:单独加入VMAT抑制剂利血平对PC12细胞无毒性作用;利血平协同多巴胺明显增加多巴胺的毒性,使同样浓度的多巴胺诱发PC12细胞的凋亡率明显增加.加入还原型谷胱甘肽(GSH)、二硫苏糖醇(DTr)和脉冲1号使PC12细胞的生存率明显提高.结论:VMAT功能抑制触发了多巴胺内源性毒性可诱发细胞凋亡,具有抗氧化作用的制剂有细胞保护作用.
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囊泡单胺类转运体功能抑制对PC12细胞凋亡的影响
目的:研究帕金森病黑质多巴胺神经元的死亡机理.方法:用四甲基偶氮唑盐(MTT)法及流式细胞仪观察囊泡单胺类转运(VMAT)功能抑制对大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡的影响.结果:单独作用的VMAT抑制剂利血平对PC12细胞无毒性作用;超过一定浓度的多巴胺(0.3 mmol/L)对PC12细胞有毒性作用;利血平协同多巴胺明显增加多巴胺的毒性,使同样浓度的多巴胺诱发PC12细胞的凋亡率明显增加,致使较低浓度的多巴胺(0.15 mmol/L)就可降低PC12细胞生存率.结论:VMAT功能抑制引发了多巴胺的内源性毒性,进而诱发多巴胺神经元的凋亡,可较好地解释帕金森病的发病机理.
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囊泡单胺类转运体功能抑制在帕金森病发病机制中作用的研究
帕金森病(PD)发病机制有多种学说,近年的科学研究从帕金森病黑质多巴胺能神经元选择性受损出发,发现黑质纹状体系统自身的多巴胺递质囊泡转运体(VMAT 2)受到抑制而触发的多巴胺内源性毒性可能在帕金森病发病机制中起了关键的作用[1,2].2000～2002年,本课题组通过研究加入VMAT特异性抑制剂利血平(RE)后[3],cDNACHO细胞(转PC12细胞含VMAT 2基因的转基因中国仓鼠卵细胞)和野生株中国仓鼠卵细胞(wtCHO细胞)的死亡方式及多巴胺毒性在大鼠嗜铬瘤细胞(PC12)细胞的作用途径,探讨了PD的发病机制及VMAT 2的细胞保护作用.
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利血平和多巴胺对大鼠嗜铬瘤细胞生长的影响
目的:研究囊泡单胺类转运体(VMAT)功能抑制在帕金森病发病机制中的作用途径.方法:用MTr法及流式细胞仪观察VMAT功能抑制对大鼠嗜铬瘤细胞(PC12)存活的影响和细胞死亡方式.结果:单独作用的VMAT抑制剂利血平对PC12细胞无毒性作用;超过一定浓度的多巴胺(0.2 mmol/L)对PC12细胞有毒性作用;利血平协同多巴胺明显增加多巴胺的毒性,使同样浓度的多巴胺诱发PC12细胞的凋亡率明显增加.随着多巴胺浓度的增加脂质过氧化物丙二醛(MDA)亦相应增加.受药物毒性作用的PC12细胞主要以凋亡途径死亡.结论:VMAT功能抑制触发的多巴胺内源性毒性可能通过氧化应激诱发凋亡和坏死而发挥毒性作用.
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6-羟多巴胺及囊泡单胺类转运功能抑制对PC12细胞凋亡的影响
目的 探讨6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)及囊泡单胺类转运体(vesicular monoamine transporter,VMAT)功能抑制对大鼠嗜铬细胞瘤PC12 细胞细胞凋亡的影响.方法 不同浓度6-OHDA(25、50、100、200 μmol/L)及VMAT功能抑制剂利血平(50、100、400、1 600 nmol/L)与6-OHDA(100 μmol/L)作用于PC12细胞,于不同时间点(12、24、36、48 h)用流式细胞仪检测细胞凋亡率,并用Western blot 法检测PC12细胞Bcl-2蛋白及Bax蛋白活性.结果 加入不同浓度的6-OHDA时PC12细胞凋亡随6-OHDA浓度增加显著上升,并且引起Bcl-2蛋白表达抑制,Bax蛋白表达上升,具有时间依赖性.加入利血平后,相应的细胞凋亡增多,Bcl-2蛋白表达降低明显,Bax蛋白表达增多,差异有统计学意义.结论 研究提示6-OHDA能诱导PC12细胞凋亡,并呈剂量及时间依赖性,其作用机制涉及到VMAT功能抑制触发了6-OHDA的内源性毒性,抑制Bcl-2蛋白的表达,促进细胞内Bax的表达,进而诱发多巴胺能神经元的凋亡.
