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转移相关基因2在胃癌中的表达及其与核转录因子Sp1的相关性
目的 观察转移相关基因2( MTA2)在胃癌组织中的表达特征,明确MTA2表达与核转录因子Sp1表达的相关性.方法 采用免疫组织化学染色技术(IHC)和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法,检测83例手术切除的胃癌原发灶和对应癌旁胃黏膜组织中MTA2的表达情况.采用IHC方法检测上述标本中核转录因子Sp1的表达.结果 MTA2在胃癌组织中的阳性表达率为31.3％,明显高于癌旁胃黏膜组织(12.0％),差异有统计学意义(P＜0.01).MTA2阳性与胃癌的浸润深度相关(x2=5.677,P＜0.05),但与患者的性别、年龄、分化程度、Lauren分型、淋巴结转移、远处转移和TNM分期无明显相关.MTA2的表达与胃癌组织中核转录因子Sp1的表达有关(r =0.320,P＜0.05),MTA2在Sp1阳性表达的胃癌组织中的表达率显著高于Sp1阴性表达者(x2=9.565,P＜0.01).RT-PCR检测结果显示,在Sp1高表达的胃癌组织中,MTA2 mRNA表达水平升高.结论 MTA2在胃癌组织中的表达率高于癌旁胃黏膜组织,并与胃癌的浸润深度相关.MTA2在核转录因子Sp1阳性胃癌组织中呈高度表达,可能与Sp1的转录调控有关.
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核转录因子Sp1在二氧化硅活化的Ⅱ型肺泡细胞中的表达及作用
目的 研究二氧化硅(SiO2)刺激的Ⅱ型肺泡细胞(A549)中核转录因子Sp1表达和定位的动态变化,探讨其在矽肺发生发展中的作用.方法 复制SD大鼠矽肺模型,免疫组化检测体内SiO2刺激的Ⅱ型肺泡细胞中核转录因子Sp1蛋白表达的定位及其动态变化;逆转录-聚合酶链反应检测体外SiO2刺激的A549细胞中核转录因子Sp1 mRNA的动态变化;免疫细胞化学、Western印迹检测体外SiO2刺激的A549细胞中核转录因子Sp1蛋白表达的定位及其动态变化.结果 大鼠矽肺模型中,SiO2刺激组与空白对照组相比,Ⅱ型肺泡细胞中核转录因子Sp1蛋白表达上调,于第7～14天达高峰;体外SiO2作用A549细胞30～960 min,Sp1 mRNA表达呈现先升后降,峰值位于60 min;Sp1总蛋白和核蛋白表达亦呈现先升后降的趋势,总蛋白表达峰值位于120 min,核蛋白峰值位于240 min;Sp1蛋白于60 min开始发生明显的核移位,240 min时核移位明显.结论 SiO2能通过增强Ⅱ型肺泡细胞(A549)中Sp1的表达和核移位,从而在矽肺的发生发展过程中起重要的作用.
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缺氧环境下核转录因子Sp1在体外培养的人视网膜色素上皮细胞中的表达
目的 研究缺氧对体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞中核转录因子Sp1表达的影响.方法 将体外培养的人RPE细胞置于含终浓度为200μmol·L-1CoCl2的培养液中培养以建立RPE细胞化学缺氧模型.在缺氧后即刻(即常氧状态下)、2 h、4 h、8 h、12 h和24 h终止缺氧,用细胞免疫荧光和Western blotting分别检测RPE细胞中核转录因子Sp1蛋白表达部位和量的动态变化;RT-PCR检测RPE细胞中Sp1 mRNA表达量的动态变化.结果 缺氧后即刻(即常氧状态下)Sp1蛋白荧光主要分布于RPE细胞质内;随缺氧时间延长,细胞质内绿色荧光强度减弱,细胞核荧光强度明显增强,至缺氧后12 h,细胞核荧光强度达到高水平.随着缺氧时间延长,RPE细胞内Sp1 mRNA和蛋白水平逐渐增高,至12 h达峰值,24 h表达已降低,但仍高于常氧状态.结论 缺氧早期可使RPE细胞内Sp1的表达水平增高,并促使其蛋白从细胞质向细胞核内转移,提示Sp1可能在视网膜脉络膜缺血缺氧性疾病的发生中起着一定作用.
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川西獐牙菜醇提物上调HepG2细胞膜转运蛋白MRP3、核转录因子SP1及核受体CPF、PXR表达
目的 体外培养HepG2细胞观察川西獐牙菜醇提物(Swertia mussitii Franch)对多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance protein 3,MRP3)、核转录因子SP1 (specificity protein 1 transcription factor,SP1)及核受体孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、CYP7A启动子结合因子(CYP7A promoter-binding factor,CPF)表达的影响.方法 用MTT比色法检测川西獐牙菜醇提物的佳作用浓度,再分别于0、12、24、48、72h刺激HepG2细胞,抽提细胞的RNA、总蛋白和核蛋白,采用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测膜转运蛋白MRP3、转录因子SP1及核受体PXR、CPF在转录与蛋白水平的表达变化.每个时间点设立阴性对照DMSO组和阳性对照熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)组.结果 川西獐牙菜醇提物可显著诱导HepG2细胞膜转运蛋白MRP3的mRNA和蛋白水平的高表达,其作用强于UDCA(P＜0.05).川西獐牙菜醇提物也可明显上调核转录因子SP1及核受体PXR的mRNA和蛋白表达水平,作用强于UDCA.对CPF表达的上调作用与UDCA相当(P＜0.05).结论 川西獐牙菜醇提物可刺激HepG2细胞膜转运蛋白MRP3上调,且有可能是通过核转录因子SP1及核受体PXR、CPF上调其表达.
