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干扰Wrap53基因调控人骨肉瘤U2OS细胞放射敏感性实验研究
目的:探讨干扰Wrap53基因表达对肿瘤细胞放射敏感性的作用及其分子机制.方法:构建针对Wrap53的干扰质粒;脂质体转染法转染至p53野生型(wtp53)的人骨肉瘤U2OS细胞;RT-PCR和蛋白质印迹法检测Wrap53和wtp53基因的mRNA和蛋白表达;克隆形成实验测定放射敏感性参数;流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析细胞周期变化.结果:Wrap53的特异性shRNA质粒转染U2OS细胞后,细胞内Wrap53和wtp53的mRNA和蛋白表达水平均受到明显抑制;Wrap53基因干扰组U2OS细胞的D0值为0.44±0.01,明显高于阴性对照组0.37±0.01,P=0.001,Wrap53基因干扰组SF2值为0.72±0.10,高于阴性对照组0.44±0.02,P=0.047;Wrap53干扰细胞在放射后16 h(P=0.014)和24 h(P=0.011)的G2/M期阻滞更加明显,显著高于对照组;但Wrap53干扰细胞在放射后出现G1期阻滞减少,以放射后24 h为显著,P=0.001.结论:干扰Wrap53基因表达降低了U2OS细胞的放射线敏感性,该作用可能与下调wtp53表达和诱导细胞放射后G2/M期阻滞有关.
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调节p53途径—提高癌症治疗效率
p53肿瘤抑制蛋白,也被称为基因组监控因子,是一种保护细胞免受一系列生理逆境(例如致癌基因活化、辐射、有丝分裂压力、核糖体压力和化学损害)的转录控制因子.这些生理逆境会导致依赖于p53激活的信号产生,并通过复杂的相互作用网络定位到细胞核,起始转录或抑制许多基因的表达,这些基因与诱导生长停滞、修复、细胞凋亡、衰老或者改变新陈代谢有关.由于p53途径对于调控疾病有如此重要的作用,使得针对该途径的药物干预日益成为人们关注的焦点.本文对调节p53功能的新研究进展进行综述,并对有关p53基因的癌症治疗前景进行展望.
