首页 > 文献资料
-
靶向VEGF发夹状RNA对宫颈癌HeLa细胞抑制作用的研究
目的:运用RNAi技术下调血管内皮生长因子(VEGF)在HeLa细胞中的表达,观察其对肿瘤细胞凋亡的影响,为人宫颈癌治疗提供理论依据.方法:设计并构建针对VEGF的携带绿色荧光蛋白( GFP)发夹状RNA (shRNA)质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-shRNA),脂质体法转染HeLa细胞；荧光显微镜观察GFP的表达,并计算转染效率；RT-PCR检测HeLa细胞VEGF的表达,筛选出靶序列；再用流式细胞仪法检测细胞凋亡.结果:构建的PGPU6/GFP/Neo载体成功转入HeLa细胞；转染48 h后,HeLa-shVEGF1组HeLa细胞VEGFmRNA表达的抑制率为75.0％；与HeLa组和HeLa-shNC组相比,HeLa-shVEGF1组HeLa细胞凋亡率明显增加,P＜0.01.结论:本研究构建的PGPU6-shRNA表达载体携带GFP便于观察细胞的转染情况,且不影响U6启动子的转录,同时有效沉默了VEGF基因,明显增加HeLa细胞的凋亡,为未来肿瘤的治疗提供新途径.
-
靶向X基因shRNA特异抑制HBV基因表达和复制
目的:研究针对HBV X基因小发夹RNA(shRNA)对HBV基因表达和复制的抑制作用.方法:利用分子克隆方法构建了4个HBV X基因特异性shRNA的表达质粒pshHBx1-4,与HBV复制性质粒共转染HepG2细胞,Northern和Southern印迹法检测HBV的mRNA和病毒复制中间体,化学发光微粒免疫分析方法检测细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg,免疫荧光染色分析细胞HBcAg的表达水平.结果:共转染pshHBx1-4显著抑制HBV mRNA表达、降低细胞培养上清中HBsAg和HBeAg的水平和细胞内HBcAg的表达水平、并有效抑制HBV的病毒复制中间体的合成.结论:HBV X基因特异性的shRNA可以有效抑制HBV的基因表达和病毒复制,有可能发展成为新的抗HBV制剂.
