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septin2基因短剪接本转表达产物对小鼠皮肤培养细胞作用的实验研究
目的 构建septin2基因短剪接本的真核表达载体,探讨其在体外培养的小鼠皮肤培养细胞中的表达及对细胞的作用.方法 特异引物PCR扩增鼠胚皮肤mRNA逆转录产物,获得septin2基因短剪接本septin2s.构建其真核表达载体pcDNA3.1(-)/septin2s,转染体外培养的小鼠表皮细胞及成纤维细胞.RT-PCR法检测septin2s的表达,并进行细胞形态及生长动力学分析.结果 septin2s在转染的表皮细胞及成纤维细胞中均获得表达,表皮细胞增殖现象明显,而成纤维细胞无显著变化.结论 通过构建真核表达载体pcDNA3.1/septin2s,并使其在体外培养的小鼠皮肤培养细胞中表达,为揭示其在鼠胚皮肤中的功能和作用奠定了基础.
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利用电转染技术对大鼠原代系膜细胞进行Septin2质粒和siRNA转染的研究
目的:利用电转染技术,对大鼠原代系膜细胞进行Septin2质粒和siRNA转染,制备出Septin2过表达和低表达的细胞模型.方法:培养原代系膜细胞,利用电转染方法,转染pEGFP-C1、pRK5和pRK5- Septin2质粒,以及Septin2的siRNA.结果:通过荧光显微镜观察,pEGFP-C1转染的阳性率可达40%,pRK5-Septin2质粒转染组Septin2表达显著升高,而Septin2 siRNA转染组Septin2表达显著下降.结论:利用电转染方法转染Septin2质粒和siRNA,成功的建立了Septin2过表达和低表达的细胞模型,为日后研究Septin2的功能建立基础.
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Septin2在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究GTP结合蛋白氯苄乙胺2(Septin2)在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞增殖、凋亡的影响.方法:对基因表达综合数据库(GEO)中GSE54129数据集的基因芯片进行分析,比较胃正常组织和癌组织中Sep-tin2 mRNA的表达差异;利用Kaplan-Meier Plotter数据库进行生存分析,明确Septin2表达与胃癌预后的关系.收集胃正常和癌组织标本进行免疫组化染色,分析Septin2蛋白表达的差异.用Septin2基因表达质粒转染胃癌SCG-7901和MNK-45细胞,观察细胞增殖和凋亡情况.结果:胃癌组织中Septin2 mRNA和蛋白表达水平均高于正常组织(P<0.05),Septin2 mRNA表达水平与胃癌预后相关,Septin2 mRNA高表达者中位生存时间短于低表达者(P<0.001).与空白对照组和阴性对照组相比,转染Septin2基因的SCG-7901和MNK-45细胞Septin2表达增加,细胞增殖能力增强,凋亡能力下降(P<0.001).结论:Septin2基因过表达可促进胃癌细胞的增殖,抑制其凋亡;与胃癌预后关系密切.
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RPs29,RPs15,EndoA及septin2基因表达产物对小鼠皮肤培养细胞的作用
目的 构建RPs29,RPs15,EndoA及septin2基因短剪接本真核表达载体,研究其对体外小鼠皮肤培养细胞的作用.方法 PCR扩增鼠胚皮肤mRNA逆转录产物,分别获得RPs29,RPs15,EndoA及septin2基因短剪接本septin2s.构建其真核表达载体pcDNA3.1(-)/RPs29,pcDNA3.1(-)/RPs15,pcDNA3.1(-)/EndoA及pcDNA3.1(-)/septin2s,转染体外培养的小鼠表皮细胞及成纤维细胞.观察基因的表达情况及其对小鼠皮肤培养细胞生物学特性的影响.结果 RT-PCR法检测RPs29,RPs15,EndoA及septin2s在转染的表皮细胞及成纤维细胞中均获得表达,pcDNA3.1(-)/RPs29和pcDNA3.1(-)/RPs15转染组成纤维细胞生长密度下降,其中pcDNA3.1(-)/RPs29转染组成纤维细胞发生凋亡,pcDNA3.1(-)/EndoA和pcDNA3.1(-)/septin2s转染组表皮细胞明显增殖.结论 RPs29,RPs15,EndoA及Septin2基因短剪接本能够影响小鼠表皮细胞及成纤维细胞的增殖.
