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泛耐药铜绿假单胞菌体外耐药模型构建及耐药机制的研究
目的 通过多种抗菌药物体外诱导构建泛耐药铜绿假单胞菌(PDRPA)体外模型,检测其相关的耐药机制;探讨联合抗菌药物体外诱导对铜绿假单胞菌( PAE)耐药性的影响.方法 采用梯度浓度琼脂平皿传代诱导法,将4株细菌接种于梯度浓度的药物平皿,直至对该药产生耐药,诱导前后测定细菌的敏感性,采用E-test法对诱导前的敏感株、诱导的泛耐药株以及临床分离的泛耐药菌株进行MBL检测；采用Real-time PCR技术,对诱导前的4株敏感PAE和诱导后的4株PDRPA以及4株临床分离的PDRPA进行主动外排系统的检测,包括:MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM.结果 经诱导后4株敏感PAE对抗菌药物的敏感性下降,MIC明显升高,按照CLSI耐药折点4株菌株全部转变为泛耐药菌株,4株临床分离的敏感PAE株诱导前后MBL检测均为阴性;临床分离的4株PDRPA株MBL检测有2株为阳性,诱导前的4株敏感PAE,4个外排系统均无高表达；相对于诱导前,经过诱导成为泛耐药菌株之后,4株耐药诱导株均存在MexA-OprM外排系统高表达,有1株存在MexCD-OprJ和1株MexEF-OprN高表达,全部菌株均无MexXY-OprM高表达；在临床分离的PDRPA中,有1株所有4个主动外排系统均高表达,有1株只有MexAB-OprM高表达,另外3个外排系统无高表达,另外2株4个外排系统均无高表达.结论 在体外抗菌药物的压力下,敏感的PAE可以经诱导变为PDRPA,耐药性稳定；体外诱导的PDRPA非产金属β-内酰胺酶,其耐药性的产生可能与主动外排泵有关,尤其是mexAB-OprM.
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舌癌耐药细胞株的建立及癌干细胞特性的实验观察
目的 建立舌癌耐药细胞株,并观察耐药细胞株癌干细胞的相关生物学特性.方法 以低浓度阿霉素持续增量诱导法建立 TCA-8113 舌癌耐药细胞株,并对亲代与舌癌耐药细胞株进行癌细胞基本特性、癌干细胞相关细胞学特性的检测,分别以计数法检测癌细胞生长曲线、倍增时间以及用 MTT 法测定耐药倍数,并进行单个细胞成克隆实验、平板克隆形成实验和悬浮球形成实验.结果 TCA-8113 舌癌耐药细胞为 "铺路石" 状上皮样生长方式,但其中异形细胞略多,耐药倍数为 22 倍;生长曲线提示其增殖速度明显低于亲本 TCA-8113 舌癌细胞,且倍增时间增加,但在细胞周期中各期细胞比例未见明显改变;TCA-8113 舌癌耐药细胞克隆形成率、单个细胞培养成株率均明显低于其亲本 TCA-8113 舌癌细胞(P﹤0.05).结论 低浓度阿霉素持续增量法可诱导形成舌癌耐药细胞株,但舌癌耐药细胞株的癌干细胞特征并不明显.
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肝癌耐药细胞株的建立及癌干细胞的特性
目的 建立肝癌耐药细胞株,并观察耐药细胞株癌干细胞的相关生物学特性.方法 采用阿霉素(ADM)浓度梯度递增法诱导建立耐药 BEL-7404人肝癌细胞株,并对亲代与耐药肝癌细胞株进行癌细胞基本特性、癌干细胞相关细胞学特性进行检测,用计数法检测癌细胞生长曲线、倍增时间与 MTT法测耐药倍数;单个细胞成株培养、平板克隆形成实验、"球囊" 细胞培养实验.结果 耐药BEL-7404 人肝癌细胞与亲本细胞相似,呈上皮样生长方式,但其中梭状细胞略多,耐药倍数为 292 倍;生长曲线表明其增殖速度明显低于亲本 BEL-7404 人肝癌细胞,且倍增时间增加;耐药 BEL-7404 肝癌细胞克隆形成率、"球囊" 细胞形成率均明显低于其亲本 BEL-7404 人肝癌细胞.结论 低浓度阿霉素持续增量法可诱导形成耐药肝癌细胞株,但耐药肝癌细胞株的癌干细胞特征并不明显.
