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HCV核心蛋白调控SREBP-1c表达水平的机制研究
目的 探讨HCV核心蛋白调控SREBP-1c的分子生物学机制.方法 构建HCV核心蛋白真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)-Core(1b,3a),转染HepG2细胞系,48 h后提取细胞总RNA和总蛋白,采用real-time PCR、Western blot等方法检测脂代谢相关基因Sirt1和SREBP-1c的mRNA和蛋白表达水平;构建Sirt1启动子报告基因表达载体pGL4.10-Sirt1,与pcDNA3.1/myc-His(-)-Core(1b,3a)共转染HepG2细胞系24 h后检测核心蛋白对Sirt1启动子活性的影响;构建pmirGLO-SREBP-1c-3'-UTR报告基因表达载体,与pcDNA3.1/myc-His(-)-Core(3a)共转染HepG2细胞系48 h后检测SREBP-1c-3'-UTR相对luciferase活性.结果 与对照组相比,1b型和3a型HCV核心蛋白表达组SREBP-1c的mRNA表达上调(分别上调1.358倍和1.337倍,P=0.043、0.008)SREBP-1c蛋白表达水平上调(分别上调1.608倍和1.926倍,P=0.042、0.008);与对照组相比,1b型和3a型HCV核心蛋白表达组Sirt1 mRNA表达上调(分别上调1.566倍和1.71倍,P=0.037、0.006),Sirt1蛋白表达水平上调(分别上调1.436倍和1.588倍,P=0.026、0.009);与对照组相比,HCV核心蛋白表达组Sirt1的启动子活性无显著变化;与对照组相比,HCV核心蛋白表达组SREBP-1c-3'-UTR相对luciferase活性下调(相对值为0.667,P=0.008).结论 HCV核心蛋白上调SREBP-1c与Sirt1的表达,可能是HCV相关性肝脂肪变的发病机制之一.microRNA参与HCV核心蛋白对SREBP-1c的表达调控,而是否有microRNA对HCV调控Sirt1表达发挥作用尚待于进一步的研究证实.
