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微管正端蛋白文献资料
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破骨细胞微管正端蛋白动态成像观察
目的：采用活细胞成像技术观察破骨细胞微管正端蛋白EB1在细胞内的分布及运动，初步研究微管在破骨细胞功能中的作用。方法①用脂质体转染方法（阳离子脂质体Lip2000）转染EB1?GFP基因至Raw264?7细胞系，G418筛选转染成功的Raw264?7细胞，荧光显微镜下观察后GFP蛋白免疫荧光染色确定稳定转染EB1?GFP的Raw264?7细胞系建立；②活细胞工作站下观察转染EB1?GFP的Raw264?7细胞中EB1蛋白的运动；③用含100ng／mLRANKL和30ng／mL M?CSF的培养基分别诱导稳定转染EB1?GFP的Raw264?7细胞与正常Raw264?7细胞为破骨细胞，进行TRAP染色鉴定，比较两组细胞形态有无差别；④Raw264?7细胞系诱导出破骨细胞后，用细胞免疫荧光染色方法观察破骨细胞EB1蛋白的形态及分布；⑤活细胞工作站下观察稳转EB1?GFP的Raw264?7细胞诱导出的破骨细胞内EB1蛋白的运动状态。结果①脂质体转染方法建立了稳定转染EB1?GFP基因的Raw264?7细胞系；②观察到破骨前体细胞Raw264?7的微管正端蛋白（ EB1）的运动轨迹；③转染EB1?GFP基因的Raw264?7细胞与正常Raw264?7细胞诱导的破骨细胞TRAP染色无明显差别；④活细胞工作站观察破骨细胞微管正端蛋白EB1的运动状态，结果表明破骨细胞微管活动性较破骨前体细胞Raw264?7活动性低。结论①EB1?GFP基因对破骨前体细胞系Raw264?7诱导破骨细胞无明显影响；②微管活动性降低可能与破骨细胞骨吸收活性相关。
