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利用脂肪干细胞构建软骨修复兔膝关节软骨缺损的初步研究
目的 利用兔同种异体软骨脱细胞基质支架和脂肪干细胞体外构建组织工程软骨,探讨其修复关节软骨损伤的可行性.方法 将新西兰大白兔的脂肪干细胞与软骨脱细胞基质支架复合,于软骨细胞方向诱导培养基中培养两周,构建组织工程软骨.兔24只随机分为A、B、C 3组, A组关节软骨缺损处置入经诱导的脂肪源干细胞复合软骨基质支架, B组缺损处只置入软骨基质支架, C组软骨缺损处不做任何处理.分别于术后第12周处死动物,修复处行大体、组织学、Ⅱ型胶原免疫组化染色和透射电镜检测.结果 A组软骨缺损处被类软骨组织填充,修复区表面光滑;Ⅱ型胶原免疫组化染色和甲苯胺蓝染色阳性;电镜下可见软骨陷窝内有细胞结构存在,且有大量均匀颗粒状细胞分泌基质成分存在,细胞周围大量胶原纤维.B组软骨缺损处为纤维组织状物填充,C组软骨缺损处无修复组织填充.结论 脂肪干细胞与软骨脱细胞基质复合并向软骨诱导后可良好地修复关节软骨缺损,具有替代正常软骨的潜力.
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软骨脱细胞基质-Ⅱ型胶原纳米支架复合BMSC修复兔关节软骨缺损的实验研究
目的：观察软骨脱细胞基质（Cartilage acellular extracellular matrix，CAEM）-Ⅱ型胶原（Collagen Ⅱ，COLⅡ）纳米支架，复合骨髓基质干细胞（Bone marrow stem cells，BMSCs）修复兔关节软骨缺损的效果。方法 CAEM和COLⅡ按质量比1∶1混合，通过静电纺丝技术制备组织工程纳米支架。将第二代BMSCs种植到该支架上，培养箱内静置2 h。12只日本大耳白兔随机分为实验组和对照组，将细胞支架复合物植入实验组兔膝关节软骨缺损处，对照组仅行膝关节软骨缺损建模。12周后实验动物取材，大体观察修复效果，并行HE染色、Ⅱ型胶原染色观察。结果大体观察见实验组软骨缺损修复良好，对照组软骨缺损处由肉芽样组织充填。 HE染色显示，实验组关节软骨缺损处可见软骨陷窝形成，对照组关节软骨缺损处仅有纤维组织充填。实验组修复区Ⅱ型胶原染色为阳性，对照组为阴性。结论 CAEM-COLⅡ纳米支架复合BMSC，对兔关节软骨缺损具有较好的修复能力，具有潜在的临床应用价值。
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Ⅱ型胶原-透明质酸-软骨脱细胞基质制备组织工程软骨支架的实验研究
目的 探索Ⅱ型胶原(CollagenⅡ,COLⅡ)-透明质酸(Hyaluronic acid,HA)-软骨脱细胞基质(Cartilage acellular extracellular matrix,CAEM)通过低温冷冻法制备组织工程软骨支架的可行性.方法 将COLⅡ和HA及CAEM按15∶3∶45的比例混合,通过低温冷冻干燥的方法制备组织工程软骨支架,测定其孔隙率、吸水率、降解率,检测支架的理化性能,并行HE染色及甲苯胺蓝染色观察支架结构情况.用CCK8法评价其细胞毒性及粘附性情况.结果 COLⅡ-HA-CAEM复合支架孔隙率为87.3％±3.7％,吸水率为1522.0％±29.3％,21天降解率为29.2％±2.4％,CCK8法检测结果显示,COLⅡ-HA-CAEM复合支架对细胞具有良好的粘附性,其生物学性能良好.结论 COLⅡ-HA-CAEM复合支架能为软骨细胞的生长和增殖提供优良的微环境,在组织工程软骨重建中具有潜在的应用价值.
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软骨脱细胞基质-Ⅱ型胶原制备组织工程软骨纳米支架的实验研究
目的 探索软骨脱细胞基质CAEM-Ⅱ型胶原(COLⅡ)通过静电纺丝法制备组织工程纳米支架的可行性.方法 将兔肋软骨脱细胞、脱脂、酶解后干燥获得CAEM,再将CAEM和COLⅡ按质量比1:2的比例混合,通过静电纺丝技术制备组织工程纳米支架,通过测定其吸水率、降解率等检测支架的理化性能,用CCK8法评价其细胞毒性及粘附性情况.结果 CAEM-COLⅡ纳米支架纤维直径为(627±165.4)nm,吸水率为(623.0±27.4)％,35天降解率为(45.6±5.8)％,CCK8法检测结果显示CAEM-COLⅡ复合支架对软骨细胞具有良好的粘附性,生物学性能良好.结论 CAEM-COLⅡ纳米支架能为软骨细胞的生长和增殖提供优良的微环境,在组织工程软骨重建中具有潜在的应用价值.
