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干预CD137-CD137配体轴对载脂蛋白E基因敲除小鼠活化T细胞核因子c1表达的影响
目的 探讨CD137-CD137配体(CD137L)相互作用对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/)小鼠活化T细胞核因子c1( NFATc1)表达的影响.方法 采用ApoE-/-小鼠颈动脉硅胶圈置入法快速建立动脉粥样斑块模型.分别采用免疫组织化学及流式细胞术检测小鼠颈动脉斑块及脾脏淋巴细胞中NFATc1表达.体外培养的小鼠淋巴细胞NFATc1 mRNA和蛋白表达分别应用RT-PCR和流式细胞技术检测.结果 体内抗CD137特异性刺激CD137-CD137L轴后,斑块及脾脏中淋巴细胞中NFATc1表达增加.体外培养的淋巴细胞中抗CD137刺激CD137-CD137L轴后,淋巴细胞NFATc1 mRNA和蛋白表达明显上调,刺激浓度以20 μg/ml时作用强,刺激时间24 h佳(P＜0.05).抗CD137L特异性阻断CD137-CD137L轴能明显抑制NFATc1 mRNA及蛋白表达,浓度以20 μg/ml时抑制作用强,抑制时间24 h佳(P＜0.05).结论 CD137-CD137L相互作用能调控ApoE-/-小鼠NFATc1的表达.
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核因子κB受体活化因子通过TRPC6-NFATc1信号通路介导足细胞损伤
目的 探究Rank通过TRPC6-NFATc1信号通路介导足细胞损伤.方法 (1)通过荧光定量PCR、Western印迹及免疫荧光染色检测Ionomycin刺激下足细胞Rank表达;(2)足细胞转染Rank-siRNA后,荧光定量PCR及Western印迹检测沉默效率,Western印迹检测足细胞标记蛋白Podocin表达;(3)通过Western印迹及免疫荧光染色检测沉默Podocin后足细胞核NFATc1表达;(4)Western印迹检测沉默Rank后TRPC6的表达,通过免疫共沉淀(Co-IP)检测Rank与TRPC6间关联.结果 (1)Ionomycin刺激下足细胞Rank表达增加;(2)沉默Rank表达后足细胞标记蛋白Podocin表达上调;(3)沉默Rank后足细胞核内NFATc1表达减少;(3)沉默Rank后足细胞TRPC6表达减少,Co-IP显示Rank结合TRPC6,且Ionomycin刺激下结合量表达增多.结论 Rank对足细胞具有损伤作用,其机制为Rank结合TRPC6调控NFATc1,从而介导足细胞损伤.
关键词： 足细胞 核因子κB受体活化因子 瞬时受体电位通道 活化T细胞核因子类
