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卡介苗预防哮喘大鼠模型形成及其与γδ T细胞关系的研究
目的探讨卡介苗(BCG)对哮喘的预防作用及其与γδT细胞的关系.方法 Wistar大鼠40只,随机分为4组,每组10只,用"冻干皮内注射用卡介苗"给大鼠皮内注射,8周后应用鸡卵清蛋白(OVA)致敏并雾化吸入刺激,制作致敏大鼠模型;测定气道反应性变化,并收集外周血单个核细胞(PBMC)和支气管肺泡灌洗液(BALF);采用流式细胞仪检测γδ T细胞抗原受体(γδ TCR)和αβ TCR阳性T细胞百分率及CD28/γδTCR平均荧光密度比,并用免疫荧光法结合HE染色以及免疫组化法检测γδ T细胞占淋巴细胞的百分率.结果常规哮喘模型组(D组)BALF中可见大量嗜酸细胞[EOS,(2.5±1.1)×108/L],与正常对照组(A组)[(0.0)×108/L]比较,差异有显著性(P<0.01);D组50%时乙酰甲胆碱[PC50,(0.28±0.10)g/L]与A组[(1.36±0.76)g/L]比较,差异有显著性(P<0.01);而BCG免疫后哮喘模型组(C组)BALF中很难见到EOS[(0.0)×108/L],与A组[(0.0)×108/L]比较,差异无显著性(P>0.05),而C组PC50[(1.28±0.77)g/L]与A组[(1.36±0.76) g/L]比较,差异无显著性(P>0.05).BALF中BCG免疫组(B组)γδ T细胞/T细胞为(41.3±6.0)%,γδ T细胞/淋巴细胞为(35.2±3.3)%,而C组γδ T细胞 /T细胞为(47.3±8.5)%,γδT细胞/淋巴细胞为(39.0±6.8)%,D组γδ T细胞/T细胞为(32.4±2.6)%,γδT细胞/淋巴细胞为(28.6±2.4)%,A组γδ T细胞/T 细胞为(27.3±0.8)%,γδT细胞/淋巴细胞为(21.8±1.9)%,四组间比较差异有显著性(P均<0.01);CD28/γδTCR平均荧光密度比B组(0.66±0.08)、C组(0.88±0.26)、D组(0.71±0.15)与A组(0.53±0.06)比较,差异也有显著性(P均<0.01).结论 BCG能预防Wistar大鼠过敏性哮喘模型的形成;γδ T细胞可能存在Th1/Th2模式,并可能是BCG调节免疫和哮喘发病过程中的重要细胞.
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自身γ δ T细胞治疗乙型肝炎的临床观察
目的 观察γδT细胞和HepG212115细胞共培养后对其HBV复制和HBeAg表达的影响.评估用γδT细胞过继回输治疗乙型肝炎的疗效.方法 在体外用异戊希焦磷酸法和IL-2激活人外周血PBMCs,细胞经10d培养后用流式细胞术检测培养前后γδT细胞含量和Perforin、GranB 、NKG2D表达量；将γδT细胞与HepG212115细胞按一定比例共孵育培养后,ELISA法测定上清中HBeAg的表达.将培养10 d的γδT细胞回输给患者；患者一个疗程接受γδT细胞总数在0.8×1010～7.0×1010.结果 培养1Od时γδT细胞数为91.27％,其细胞表达的Perforin、GranB、NKG2D分别为和62.8％、72.7％和60.8％.所扩增的γδT细胞能够部分抑制HepG212115细胞中HBeAg的表达.治疗前138例HBeAg阳性者,治疗后有76例HBeAg(55.1％)转阴.总有效率为77.51％.结论 γδT细胞能够降低HepG212115细胞中HBeAg表达；用自身γδT细胞过继回输治疗乙型肝炎后患者的HBeAg+HBV-DNA转阴率达74％.该治疗无毒副作用,对乙型肝炎是一种安全有效的治疗方法.
关键词： 异戊烯焦磷酸单酯 乙型肝炎 γ δ T细胞 HepG212115细胞 免疫治疗 -
DC细胞刺激γδ T细胞的抗白血病作用
目的研究γδ T细胞的体外生存期和抗白血病活性. 方法对外周血采集物用GM-CSF+IL-4进行培养,使其分化和扩增为树突状细胞(dendritic cells, DC);然后用DC和细胞因子IL-2刺激其CD4+ T细胞扩增后,协同DC共同刺激γδ T细胞扩增,再与多种白血病细胞株进行混合培养,进而用MTT比色法研究抗白血病能力. 结果γδ T 细胞能在体外长期大量扩增.扩增的γδ T细胞对多种白血病细胞株具有杀伤作用. 结论γδ T细胞可望用于白血病的临床免疫治疗.
