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去天门冬氨酸血管紧张素Ⅰ减轻大鼠心肌微血管内皮细胞缺血/再灌注损伤
目的 探讨去天门冬氨酸血管紧张素Ⅰ (DAA-Ⅰ)对大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)缺血/再灌注损伤的影响.方法 分离培养大鼠CMECs,建立模拟缺血/再灌注模型,完全随机分组,分为对照组、模拟缺血/再灌注组(SI/R组)、模拟缺血/再灌注+DAA-Ⅰ (2.5、3.75、5.0μmol/L)组.MTT检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,TUNEL法检测细胞凋亡,采用Western blot检测GRP78/Bip、CHOP/GADD153、pro-caspase-12、cleaved-caspase-12蛋白的表达.结果 与对照组相比较,SI/R组CMECs增殖能力明显降低(P＜0.01),凋亡率显著上升(24.85％±0.67％比3.55％ ±0.11％,P＜0.01).与SI/R组相比,SI/R+DAA-Ⅰ组细胞增殖能力明显升高(P＜0.01)并呈剂量依赖性,细胞迁移率上升(P＜0.01)并呈剂量依赖性,凋亡率明显下降(15.18％±0.40％比24.85％ ±0.67％,P＜0.01)并呈剂量依赖性.与对照组相比较,SI/R组和SI/R+DAA-Ⅰ组的GRP78、CHOP/GADD153、cleaved-caspase-12表达明显上升(均为P＜0.01).与SI/R组相比,SI/R+DAA-Ⅰ组的GRP78、CHOP/GADD153、cleaved-caspase-12表达明显降低(均为P＜0.01).结论 DAA-Ⅰ可显著抑制缺血/再灌注损伤诱导的CMECs凋亡,促进CMECs存活,改善细胞功能,其保护作用可能与下调ERS相关蛋白的表达有关.
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内质网应激在去天门冬氨酸血管紧张素Ⅰ减轻心肌微血管内皮细胞缺血再灌注损伤中的作用
目的 探讨内质网应激在去天门冬氨酸血管紧张素Ⅰ (des-aspartate-angiotensin Ⅰ,DAA-Ⅰ)抑制大鼠心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,Ⅰ/R)损伤中的作用及机制.方法 分离培养大鼠CMECs,建立模拟(simulation,S)Ⅰ/R损伤模型,按电脑随机数字表法随机分组,分为对照组、SI/R损伤组、SI/R损伤+4-苯基丁酸钠(4-phenylbutyric acid,4-PBA;内质网应激抑制剂)组、SI/R损伤+DAA-Ⅰ组、SI/R损伤+DAA-Ⅰ +Compound C[腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphateactivated protein kinase,AMPK)特异性抑制剂]组.噻唑蓝法(MTT法)检测细胞增殖能力,缺口末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡,Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78 (glucose-regulated protein 78,GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein,CHOP)、AMPK蛋白表达和磷酸化水平.结果 与对照组比较,SI/R损伤组CMECs细胞增殖能力明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(4.02％±0.85％ vs.26.21％±2.97％,P＜0.05).与SI/R组比较,SI/R+4-PBA组CMECs细胞增殖能力明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);SI/R+ DAA-Ⅰ组CMECs凋亡率明显降低,差异有统计学意义(26.21％±2.97％ vs.16.18％±2.93％,P＜0.05);SI/R+DAA-Ⅰ+Compound C组CMECs凋亡率稍微降低,差异无统计学意义(26.21％±2.97％ vs.21.68％±3.37％,P＞0.05).与对照组比较,SI/R组GRP78、CHOP蛋白表达明显升高(P＜0.05),p-AMPK稍升高.与SI/R组比较,SI/R+4-PBA组GRP78、CHOP蛋白表达明显降低(P＜0.05);SI/R+ DAA-Ⅰ组GRP78、CHOP蛋白表达明显降低(P＜0.05),p-AMPK明显升高(P＜0.05);SI/R+DAA-Ⅰ+Compound C组GRP78、CHOP蛋白表达轻度降低(P＜0.05),p-AMPK明显升高(P＜0.05),但低于SI/R+DAA-Ⅰ组(P＜0.05),差异均有统计学意义.结论 内质网应激参与大鼠CMECs的Ⅰ/R损伤,DAA-Ⅰ可显著抑制CMECs在Ⅰ/R损伤过程中的内质网应激,其分子机制可能与激活AMPK途径相关.
关键词： 去天门冬氨酸血管紧张素Ⅰ 内质网应激 心肌微血管内皮细胞 缺血/再灌注损伤 凋亡
