首页 > 文献资料
-
碱性成纤维细胞生长因子基因对猪缺血心肌心功能的影响
目的探讨经导管冠状动脉内注射碱性成纤维细胞生长因子基因(pcDNA3-bFGF),对猪缺血心肌心功能的影响.方法构建真核表达质粒pcDNA3-bFGF.开胸结扎猪冠状动脉左回旋支(LCX),建立急性心肌梗死动物模型.实验动物分为三组:手术对照组(n=6),bFGF基因左冠状动脉注射组(n=6),bFGF基因右冠状动脉注射组(n=6).术后2周,分别行选择性冠状动脉造影,并经导管冠状动脉内注射pcDNA3-bFGF2000μg.术后4周,通过超声心动图测定左心室射血分数(LVEF),评估左心室收缩功能,并再次行选择性冠状动脉造影,观察冠状动脉侧枝血管新生情况,并通过压力监测装置观察不同组动物左心室舒张末压(LVEDP).结果(1)术后4周超声心动图示左、右冠状动脉注射基因组LVEF值高于手术对照组,LVDEP低于手术对照组;(2)选择性冠状动脉造影显示,术后4周左右冠状动脉注射基因组侧枝血管明显多于对照组,左冠状动脉注射基因组,侧枝血管多于右冠状动脉基因注射组.结论经导管冠状动脉内注射bFGF基因,能促进猪缺血心肌血管新生,改善缺血心肌血供,改善心功能.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子基因 猪 心功能 -
bFGF 真核表达载体构建后分泌表达促进颌骨种植体周围骨缺损的研究
目的：构建研究碱性成纤维细胞生长因子（ basic fibroblast growth factor ， bFGF）真核表达载体，并在体外进行表达和检测。同时利用bFGF基因修饰的组织工程骨移植修复颌骨种植体周围的骨缺损。方法从骨髓基质干细胞中分离总RNA，进行RT-PCR获得bFGF cDNA。测序证实其结果正确后，构建真核表达载体。并经BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切、PCR及测序鉴定。利用Blast程序，搜索NCBI Gen-Bank中与重组质粒（ pVAX1-bFGF）中编码bF GF基因同源的序列。通过脂质体将重组质粒转染骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells， BMSCs），使用间接免疫荧光法进行表达产物检测。应用基因重组技术使bFGF重组质粒转染BMSCs，筛选出阳性细胞后，复合以多孔矿化骨移植修复颌骨种植体周围骨缺损。通过对缺损处形态及X线、组织学等检查进行评价。同时以外源性注射bFGF修复缺损组作为对照。结果 bFGF基因成功地克隆到真核表达载体pVAX 1中；pVAX1b-FGF 中编码bFGF的序列与基因库中的bFGF编码序列完全一致；间接免疫荧光表达产物检测结果显示转染重组质粒的细胞表面有绿色荧光。 bFGF基因修饰的组织工程骨成骨能力较外源性注射 bFGF组更强，周围的毛细血管大量增殖，骨髓腔通畅，骨缺损完全愈合。结论成功地构建人bFGF真核表达载体，并且此载体可以在体外进行表达。 bFGF基因修饰的骨髓基质干细胞所形成的组织工程骨成骨能力更强，对修复颌骨种植体周围骨缺损极其适合。
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子基因 真核表达载体 种植体 骨缺损 -
TGF-β1、bFGF双基因修饰骨髓间充质干细胞的实验研究
目的 以脂质体为载体来介导转化生长因子-β1(TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因修饰骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察两基因的表达情况.方法 对 SD大鼠的 BMSCs采用贴壁法联合 Percoll密度梯度离心法获得.使用PCR技术获得TGF-β1基因、bFGF基因,将其基因在真核表达载体 pcDNA3.1(+)上构建,再将两种真核表达载体通过脂质体转染至第3代 BMSCs.采用 RT-PCR、Western blot检测 BMSCs中 bFGF、TGF-β1基因的表达水平.结果 贴壁法联合Percoll密度梯度离心可以获得 BMSCs.成功构建 pcDNA3.1(+)-bFGF和 pcDNA3.1(+)-TGF-β1真核表达载体后,将其转染 BMSCs,RT-PCR、Western blot均可检测到 bFGF、TGF-β1基因的表达.结论 bFGF和TGF-β1可以通过脂质体转染方式修饰BMSCs,并获得高效表达.
