首页 > 文献资料
-
白细胞介素17促进主动脉瓣膜间质细胞向成骨样细胞转化
目的 研究白细胞介素17(IL-17)是否促进主动脉瓣膜钙化形成及其可能机制.方法 利用体外主动脉瓣膜间质细胞培养技术,瓣膜间质细胞培养传代3～5次后,采用简单随机抽样法分为两组:(1)对照组,细胞培养基中添加2 ml RPMI-1640完全培养液;(2)实验组,细胞培养基中添加2 ml RPMI-1640完全培养液和IL-17 (50 ng/ml).继续孵育48 h后,用细胞茜素红钙染色检测两组瓣膜间质细胞钙化情况,用Western blot和RT-PCR检测两组瓣膜间质细胞碱性磷酸酶(ALP)及骨形态蛋白2(BMP-2)的表达情况.结果 实验组细胞中明显钙结节形成,对照组细胞中少量钙结节形成;与对照组比较,实验组细胞ALP和BMP-2蛋白(0.741±0.063比0.184±0.032;0.900±0.060比0.396±0.030,均为P＜0.01)与基因(0.236±0.004比0.106±0.003;0.523±0.052比0.194±0.047,均为P＜0.01)表达量均明显升高.结论 IL-17可促进主动脉瓣膜间质细胞向成骨样细胞转化.
-
有机磷酸盐-与无机磷酸盐-钙化诱导培养基诱导主动脉瓣膜间质细胞钙化效果的对比研究
目的 比较有机磷酸盐(OP)-与无机磷酸盐(IP)-钙化诱导培养基(OIM)诱导主动脉瓣膜间质细胞(AVICs)钙化的效果.方法 主动脉瓣膜来源于2017年1—10月在第二军医大学附属长海医院行心脏移植的患者,取外观正常的主动脉瓣膜备用,采用改良的二次胶原酶消化法分离AVICs并随机分为A组和B组,A组采用普通培养基+OP-OIM进行培养,B组采用普通培养基+IP-OIM进行培养.采用茜素红染色检测钙化结节,采用邻甲酚酞络合酮比色法检测钙含量,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测Runt相关转录因子2(RUNΧ2)、碱性磷酸酶(ALP)mRNA相对表达量,采用蛋白质免疫印迹法检测RUNΧ2蛋白相对表达量,采用对硝基苯酚比色法检测ALP活性.结果 (1)细胞免疫荧光检测结果显示,分离得到的细胞Vimentin阳性率接近100％.流式细胞术检测结果显示,分离得到的细胞CD31阳性率为1.17％.(2)A组细胞培养21 d可见大量橘红色钙化结节,B组细胞培养7 d可见大量橘红色钙化结节.A组细胞培养21 d和B组细胞培养7 d钙含量比较,差异无统计学意义(P>0.05).(3)以细胞培养0 d作为对照,A组细胞培养21 d与B组细胞培养7 d RUNΧ2 mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);但A组细胞培养21 d与B组细胞培养7 d ALP mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05).(4)两组细胞培养0 d RUNΧ2蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组细胞培养21 d与B组细胞培养7 d RUNΧ2蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05).(5)两组细胞培养0 d ALP活性比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组细胞培养21 d与B组细胞培养7 d ALP活性比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 IP-OIM培养7 d与OP-OIM培养21 d诱导的AVICs钙化效果相当,IP-OIM诱导AVICs钙化较OP-OIM缩短14 d,可替代OP-OIM快速有效地建立体外AVICs钙化模型.
-
瘦素对主动脉瓣间质细胞成骨分化的作用及机制研究
目的 探讨瘦素(Leptin)体外刺激对主动脉瓣膜间质细胞(VICs)成骨分化的作用及其机制.方法 胶原酶消化法分离并培养猪主动脉瓣膜间质细胞,采用100 ng/ml Leptin刺激细胞24h,提取细胞RNA以及蛋白,通过实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)以及免疫印迹试验(Western blot)分别测定成骨标志物核心结合因子α1(RUNX-2) mRNA及蛋白的表达情况,同时采用Western blot检测核因子(NF)-κB总蛋白及磷酸化NF-κB蛋白(p-NF-κB)的表达情况.在Leptin刺激的同时,采用NF-κB特异性抑制剂SN50干预VICs,再次检测RUNX-2的表达情况.结果 Leptin刺激导致Runx-2 mRNA及蛋白表达显著上调,同时p-NF-κB蛋白表达显著增加,而SN50干预后Runx-2蛋白表达显著下调(P均＜0.05).结论 Leptin可致VICs成骨标志物RUNX-2表达增加,SN50干预可致RUNX-2蛋白表达下调,表明其能够诱导VICs向成骨细胞分化,并且这种作用是通过NF-κB相关信号通路实现的.
-
瘦素对主动脉瓣膜间质细胞表型转化的影响
目的:探讨瘦素对主动脉瓣膜间质细胞(valvular interstitial cells,VICs)表型转化的影响,揭示瘦素在钙化性主动脉瓣疾病(calcific aortic value disease,CAVD)发生发展中所扮演的角色.方法:胶原酶消化法分离并培养猪主动脉瓣膜间质细胞,采用含不同浓度的瘦素分别刺激细胞24 h,检测细胞裂解液碱性磷酸酶(ALP)活性,并确定佳刺激浓度.用佳刺激浓度的瘦素刺激细胞24 h,提取细胞RNA以及蛋白,通过RT-PCR以及Western blot分别测定肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)的表达情况.结果:瘦素刺激导致ALP表达上调且大刺激浓度为100 ng/mL.相较于对照组,瘦素刺激组OPN mRNA及蛋白表达增高,而α-SMA表达无明显变化.结论:瘦素能够诱导VICs向成骨细胞分化,从而促进VICs钙化.
