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过氧化氢诱导体外培养的人脾细胞凋亡
目的:研究过氧化氢(H2O2)对人脾细胞影响的时效和量效关系,以获得稳定的人脾细胞凋亡模型.方法:采用研磨法获得悬浮的人脾细胞,将细胞分组后给予相应的生理盐水或不同浓度的H2O2处理.运用四唑盐(MTT)比色法检测线粒体功能,将细胞与Annexin VFITC/PI混合孵育后使用流式细胞仪检测早期凋亡细胞.结果:人脾细胞线粒体功能及凋亡率与H2O2呈剂量-效应关系,随着H2O2浓度的增高,线粒体功能逐渐降低,而凋亡率则随H2O2浓度的增高而增加.同时它们与H2O2处理时间也存在时间-效应的关系.各处理组间细胞总凋亡率分别为55.01±9.11%(100μmol/L),44.07±9.00%(50 μmol/L),30.20±6.75%(25 μmol/L)和9.97±1.68%(对照组)存在显著差异(P＜0.05),以H2O2100μmol/L处理的细胞组于6 h达到凋亡高峰(69.28±3.01)%.结论:H2O2可以诱导体外培养的人脾细胞凋亡,建立人脾细胞凋亡模型.
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不同温度下人脾细胞DNA降解推断早期死亡时间
目的 对不同温度下人体脾细胞DNA降解状态进行多参数联合定量分析,得出温度相关的多元回归方程.方法 选取13例已知PMI的人体离体脾脏,在死后13h～34h内,分别在10℃、20℃及30℃条件下,每隔1h取材,进行细胞学涂片,Feulgen-Vans染色,选用图像分析系统检测几何参数(ID)及灰度参数(AOD、IOD、AG、LDC)指标,对不同温度的检测指标进行多元回归等统计分析,得出相应的回归方程.结果 温度相关的脾细胞DNA降解推断死亡时间回归方程是:Y=-0.668619XT+2.31609XID-33.45671XAOD-1.13296XIOD+0.44433XAG(XT=10,20,30).结论 不同温度的牌细胞AOD、IOD、ID、AG均有显著性差异,温度及反映DNA含量的各个参数与PMI存在很强的相关性,可以将温度作为参数引入方程用于推断PMI.
