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  • 基于迈克尔加成反应构建抗血小板黏附的去细胞猪主动脉瓣膜复合支架

    作者:周建良;丁静丽;聂彬恩;胡时栋;朱志刚;徐建军

    目的:对去细胞猪主动脉瓣膜(DPAV)进行聚乙二醇(PEG)改性,构建血液相容性好的复合支架(PEG-DPAV)。方法基于固相有机合成理论对去细胞瓣进行巯基化修饰利用巯基-丙烯酸酯发生的迈克尔加成反应,使引入到 DPAV 中的巯基与4-arm-PEG-acrylate 中的丙烯酸酯共价结合,全反射傅里叶变换红外光谱(ATR-FTIR)对PEG化的DPAV进行表征。复合支架血小板黏附实验评价其血液相容性, CCK-8法检测复合支架浸提液对大鼠内皮细胞增殖率的影响,评价其细胞毒性。结果 PEG-DPAV ATR-FTIR光谱:除出现DPAV特征峰外还出现PEG特征信号峰:1100,1342,C-O,-C-H2振动峰,证明DPAV成功接枝上PEG。复合支架和DPAV毒性评级均0级,和阴性对照组差异无统计学意义。大鼠内皮细胞经含浸提液的培养液培养后形态良好,增殖旺盛,复合支架表面血小板黏附数量较少,无聚集。结论利用迈克尔加成反应成功将PEG交联到DPAV上,反应条件温和,改性效果确切。复合支架表现出良好的血液相容性,无细胞毒性,适合组织工程心脏瓣膜支架的构建。

  • 体外构建经血管内皮生长因子共价修饰去细胞瓣的研究

    作者:周建良;朱志刚;丁静丽;徐建军;杨威;龚艺

    目的 基于迈克尔加成反应,体外构建经血管内皮生长因子(VEGF)共价修饰的去细胞猪主动脉瓣(DPAV)复合材料,探讨复合瓣膜的力学性能和生物学性能.方法 应用枝状化聚乙二醇(PEG)对去细胞的猪主动脉瓣PEG化,PEG化去细胞瓣(PEG-DPAV)与VEGF上的巯基发生反应,将VEGF共价修饰到去细胞瓣上(VEGF-PEG-DPAV).检测VEGF共价修饰去细胞瓣的效果;对复合瓣膜在周向和径向上力学性能进行测试;通过差示扫描量热仪(DSC)、溶血实验和细胞毒性实验测试复合瓣膜的生物学性能.结果 通过红外光谱和免疫荧光检测证实VEGF成功共价修饰到去细胞瓣上,苏木素-伊红(HE)染色和扫描电镜显示去细胞瓣膜交联PEG后,纤维增粗、排列整齐,结构更加致密.力学性能测试显示去细胞瓣PEG化后可以改善部分力学性能.DSC显示DPAV、PEG-DPAV和VEGF-PEG-DPAV组瓣膜的变性温度分别为(65.64 ±0.15)℃、(74.94±0.10)℃和(74.88 ±0.05)℃.溶血实验显示DPAV、PEG-DPAV和VEGF-PEG-DPAV组溶血率分别为(0.23±0.01)%、(0.24±0.01)%和(0.23±0.01)%.DPAV、PEG-DPAV和VEGF-PEG-DPAV组瓣膜均未表现出细胞毒性.结论 成功制备经VEGF修饰的PEG化去细胞瓣,为体外去细胞瓣的改性研究提供一种可行性方法.

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