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不同E7多肽/HLA-DRB四聚体分析检测结核患者外周血及胸水标本中多肽特异性CD4＋T细胞
目的：应用流式细胞检测技术，探讨不同 E7/HLA-DRB 四聚体检测结核患者外周血及胸水标本中E7多肽特异性CD4＋T细胞百分率之间的差异。方法复苏培养能稳定表达E7/HLA-DRB1*090102、E7/HLA-DRB1*130201、E7/HLA-DRB1*150101和E7/HLA-DRB1*130201的果蝇S2细胞株，表达、纯化、制备成相应四聚体。以37例脐带血作为研究对照组，150例肺结核患者外周血和23例结核性胸膜炎患者胸水标本为实验研究组，Ficoll法分离单个核细胞，用PE-E7/HLA-DRB四聚体和鼠抗人CD4-FTIC共染细胞，流式细胞分析检测标本中E7多肽特异性CD4＋T细胞百分率，并作统计学分析。结果结核患者外周血和胸水中，各四聚体E7多肽特异性CD4＋T细胞百分率检测结果均显著高于脐带血标本相应四聚体检测结果；胸水标本与血标本各自做4种四聚体任意2种四聚体检测结果间比较，结果显示均无统计学差异。此外，在外周血和胸水标本间，任一四聚体的检测结果也无统计学差异。结论不同 HLA-DRB 来源的E7/HLA-DRB 四聚体对于结核检测具有相当的意义，4种四聚体的结核检测特异性无明显差异。并未发现因CD4＋T细胞迁移到局部病灶而引发的胸水标本检测结果高于相应四聚体外周血检测结果。
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肺结核患者治疗期外周血及病理切片多肽特异性CD4+T细胞的检测
目的 应用四聚体技术研究肺结核患者治疗前后各时间点外周血中E7多肽特异性CD4+T细胞的变化及结核患者肺组织切片中特异性CD4+T细胞的分布.方法 培养能稳定分泌表达E7/HLA-DRB1*0404和E7/HLA-DRB1*1602的果蝇S2细胞株,表达纯化获得2种蛋白质单体,并制备成PE标记的相应四聚体,流式细胞分析检测肺结核患者外周血中特异性CD4+T细胞.制备FITC标记的四聚体,对肺结核患者的肺组织切片进行原位染色,观察特异性CD4+T细胞的分布.结果 肺结核患者治疗前组及治疗1～60 d组分别与治疗61 d后各组及脐带血组之间的四聚体阳性多肽特异性CD4+T细胞差异均有统计学意义(P＜0.05),但治疗前组与治疗1～60 d组之间、治疗61 d后各组之间及分别与脐带血之间、2个四聚体检测组之间差异均无统计学意义(P＞0.05).在肺结核患者的肺组织切片中可观察到特异性CD4+T细胞.结论 制备的2种E7/HLA-DR四聚体对于结核病的检测具有一定的意义,可以用于检测研究肺结核患者治疗前后外周血E7多肽特异性CD4+T细胞的变化及肺结核患者局部病理组织中特异性CD4+T细胞的分布.
