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人脐静脉血内皮克隆形成细胞的分离培养与鉴定
目的 体外建立一种简便的人脐静脉血内皮克隆形成细胞(ECFCs)分离培养方法,并对其进行鉴定.方法 无菌条件下收集脐静脉血,以密度梯度离心法分离脐血单个核细胞(MNCs),诱导分化为ECFCs,倒置显微镜下观察其原代及传代培养细胞生长状况并通过流式细胞仪、免疫细胞化学、荧光双染色对ECFCs进行鉴定.结果 ECFCs培养过程可出现边界清楚的类圆形单层鹅卵石样细胞集落,细胞增殖能力强,连续传十几代细胞形态稳定,ECFCs高表达内皮系细胞表面抗原,而不表达造血系表面标记；可吞噬Dil-ac-LDL并结合FITC-UEA-1.结论 通过简单、可靠的实验方法获得了ECFCs,为进一步探讨其生物学功能及临床应用提供了基础.
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内皮克隆形成细胞旁分泌对人脐静脉内皮细胞生物学功能的影响
背景:研究表明,内皮克隆形成细胞移植对缺血损伤组织的血管新生具有促进作用.然而,这一作用是否与其旁分泌效应有关,仍有待进一步研究证实.目的:检测人脐血来源内皮克隆形成细胞条件培养基中细胞因子分泌谱,并观察内皮克隆形成细胞条件培养基对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及成管能力的影响.方法:从人脐血中分离、培养内皮克隆形成细胞,并进行细胞鉴定.采用抗体芯片对无血清内皮克隆形成细胞条件培养基中的细胞因子进行检测.采用无血清EBM-2培养基作为对照组,应用CCK-8、细胞划痕实验、Matrigel成管实验检测内皮克隆形成细胞条件培养基对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及成管能力的影响.结果与结论:①原代培养细胞形态:培养的细胞呈"铺路石"样生长,表达CD34,KDR及CD144,不表达CD45及CD133,Dil-acLDL摄取及FITC-UEA-I结合双阳性,在Matrigel基质胶中可形成管腔样结构,以上均符合内皮克隆形成细胞的特征;②抗体芯片检测:内皮克隆形成细胞条件培养基高表达30种促血管新生因子;③CCK-8检测:实验组人脐静脉内皮细胞在24,48,72 h增殖活性均高于对照组(P<0.01);④细胞划痕实验结果显示,实验组人脐静脉内皮细胞迁移率在12,24 h均高于对照组(P<0.01);⑤与对照组相比,实验组人脐静脉内皮细胞在Matrigel基质胶上可形成更多的管状结构(P<0.01).⑥结果表明:内皮克隆形成细胞能通过旁分泌效应促进成熟内皮细胞的生物活性.
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内皮克隆形成细胞的研究进展
内皮克隆形成细胞(endothelial colony-forming cells,ECFCs)是一种有别于经典内皮祖细胞的具有强大血管新生功能的晚期内皮祖细胞.ECFCs在心、肺、脑的缺血修复中具有强大的血管生成潜能,在缺血肢体及损伤骨组织的修复中能明显诱导血管相关因子的表达并促进血管新生.ECFCs具有强大的肿瘤归巢效应,与肿瘤的发生发展及预后关系密切,可为血管再生研究、肿瘤治疗、组织再生工程等领域提供新的方向.
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内皮克隆形成细胞条件培养基对人真皮成纤维细胞生物学作用的影响
目的:探讨内皮克隆形成细胞条件培养基(ECFCs-CM)对人真皮成纤维细胞(HDFs)生物学作用的影响.方法:从人脐带血中分离内皮克隆形成细胞(ECFCs)并鉴定;采用抗体芯片检测ECFCs-CM中细胞因子表达谱;将ECFCs-CM作用于HDFs,EBM-2作为对照,采用CCK-8法、细胞划痕实验及流式细胞术分别检测细胞的增殖、迁移及凋亡情况.结果:原代培养细胞符合ECFCs的特征;ECFCs-CM相对高表达PDGF-BB、EGF等细胞因子;实验组HDFs增殖能力和迁移能力均高于对照组,且在血清饥饿环境下实验组HDFs凋亡率低于对照组.结论:ECFCs-CM可促进HDFs增殖和迁移,并可抑制其在血清饥饿环境下的凋亡.
