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应用流式细胞术从孕妇外周血分选胎儿有核红细胞并进行DYS14基因扩增与检测
目的从孕妇外周血分选胎儿有核红细胞,对DYS基因进行扩增,并对扩增准确率进行分析.方法应用流式细胞术(flow cytometry,FCM )从孕妇外周血分选胎儿有核红细胞(Nucleated red blood cells, NRBCs),应用套式PCR特异性扩增DYS14基因,琼脂糖凝胶电泳检测.结果 30例受检者中,共有男婴18例,有核红细胞组D YS14基因的检出率为50.0%(9/18).结论 NRBCs分选技术的建立使非创伤性产前基因诊断成为可能,但如何进一步改进方法提高分选率,确保诊断的灵敏性, 降低漏诊率,仍是需要进一步解决和完善的问题.
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胚外体腔液中胎儿细胞DNA检测在产前诊断中的应用
目的探讨胚外体腔液中细胞DNA检测用于孕早期诊断性连锁遗传疾病的可行性和准确性.方法对 25 例孕 6～11 周、要求人工流产的孕妇术前行胚外体腔穿刺术,抽取胚外体腔液0.5～3 ml.采用煮沸法对胚外体腔液进行 DNA 抽提, Picogreen 染料对DNA 进行定量分析.采用 X, Y 两对引物对 DNA 进行 PCR 检测.随后行人工流产术,取少量绒毛组织进行染色体核型分析,并与胚外体腔液中的DNA检测结果作对照.结果 0.5～3 ml 胚外体腔液中含有 750～6270 个胎儿细胞.男性胎儿 DNA 扩增结果出现两个条带( X , Y )11例,女性胎儿出现1个条带( X )14例. 与绒毛组织染色体核型分析结果完全一致.结论胚外体腔液中细胞DNA检测,用于孕早期性连锁遗传疾病的产前诊断具有快速、敏感的特点.
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对孕妇外周血中的单个有核红细胞及游离DNA来源的鉴定
目的探讨孕妇外周血中单个胎儿有核红细胞及游离DNA在非创伤性产前诊断的可行性.方法对116例孕妇外周血进行检测.(1)对51例14～26孕周的妇女外周血经密度梯度离心后用显微操作分离单个有核红细胞.(2)提取65例孕妇(5～40孕周)外周血血浆DNA.(3)应用巢式聚合酶链反应(PCR)扩增单个有核红细胞的男性SRY基因,应用引物延伸预扩增(PEP)法及巢式PCR扩增孕妇血浆游离DNA的SRY基因.结果 (1)分选单个有核红细胞的成功率为90.20%(46/51).(2)单细胞SRY基因的结果与胎儿实际性别的符合率为82.61%(38/46),敏感性为80.00%(24/30),特异性为87.50%(14/16).(3)游离DNA的SRY基因的结果与胎儿实际性别的符合率为90.77%(59/65),敏感性为89.13%(41/46),特异性为94.74%(18/19).结论 (1)孕妇外周血中单个有核红细胞及游离的DNA可来自胎儿,它可成为产前诊断的胎儿物质来源.(2)单细胞分离技术使孕妇外周血中的胎儿有核红细胞的分选纯度几乎达到100%,解决了母胎细胞混合的难题,为非创伤性产前诊断提供了一条新思路.
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非侵入性产前诊断——母体血中胎儿DNA检测
目前产前诊断主要通过绒毛取样或羊膜腔穿刺获得胎儿遗传物质,可能会对妊娠妇女和胎儿造成影响.近年来,通过检测母血中胎儿DNA进行非侵人性产前诊断飞速发展,胎儿性别和RhD血型鉴定已广泛应用于临床,单基因遗传病和非整倍体的准确诊断也进行了实验论证.相信在未来几年,检测母血中胎儿DNA进行非侵人性产前诊断将在临床上有更广泛的应用.
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母体血浆中游离胎儿DNA检测在产前诊断和产科临床领域中的应用
产前诊断又称宫内诊断或出生前诊断,是指胎儿出生前应用多种检测手段,如影像学、生物化学、细胞遗传学及分子生物学等技术,对胎儿先天性缺陷或遗传性疾病进行诊断,是实现优生优育的重要措施之一.根据对胎儿出生前进行宫内诊断所采用的方法对母体或胎儿是否造成创伤性而将产前诊断技术分为有创性和无创性.
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STR和性别位点PCR产物的荧光自动检测
运用荧光染料标记引物、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(denaturing polyacrylamide gel electrophoresis,denaturing PAGE)结合荧光法检测6个STR位点(vWA31A、TH01、F13A1、FES、TPOX、CSF1PO)及1个性别鉴定位点(Amelogenin),就荧光自动检测的重复性、准确性、分辩力等方面进行了研究,建立了6个STR位点等位基因判定视窗及用荧光DNA测序仪进行STR分析的方法,实现电脑自动判读结果.结果表明,本文所述STR和性别鉴定的自动检测方法可靠、分辨力高(可达1bp),所得数据有助于荧光自动DNA分型软件系统的数据积累.
关键词： 荧光DNA自动测序仪 STR分型 性别预选 人工假象
