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艾蒿花粉主要变应原的分离、纯化与鉴定
目的对我国蒿属花粉中常见、重要的变应原艾蒿花粉进行分离、鉴定与纯化.方法采用不同的提取液得到艾蒿花粉粗浸液,经饱和(NH4)2SO4分级沉淀后用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白质组分,并用凝胶成像系统测定各组分的相对分子质量(Mr);采用Western blot鉴定其主要及次要变应原;通过DEAE-Cellulose DE-32离子交换层析(ion exchange chromatography,IEC)和Sephadex G-75凝胶层析(gel chromatography)对艾蒿花粉变应原进行纯化.结果分离后得到20多种蛋白质组分,其中Mr为58×103、38×103、25×103、20×103、16×103等5个条带蛋白含量丰富;分离到的蛋白质组分中有9种蛋白能与确诊的蒿属花粉过敏患者血清中蒿属花粉特异性IgE结合,其中Mr为62×103、43×103、38×103的蛋白条带的结合率高;经纯化后仅得到Mr为62×103的主要变应原.结论艾蒿花粉的主要变应原Mr分别为62×103、43×103和38×103,层析技术可以对Mr为62×103的主要变应原成分进行纯化.
关键词： 艾蒿花粉 SDS-PAGE Western blot 离子交换层析 凝胶层析 -
艾蒿、青蒿花粉变应原组分的研究
目的对艾蒿、青蒿花粉变应原进行分离、鉴定.方法采用不同的提取方式得到艾蒿、青蒿花粉的粗浸液,通过饱和(NH4)2SO4分级沉淀、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白质组分,并用凝胶成像系统测定各组分的相对分子质量(Mr);采用Western-blotting鉴定2种花粉的主要及次要变应原.结果艾蒿、青蒿花粉分别分离到二十和十多种蛋白质组分.其中艾蒿花粉的组分中有9种蛋白能与患者血清中蒿属花粉特异性IgE结合,Mr为62000、43 000、38 000的蛋白条带的结合率高.青蒿花粉的组分中有11种蛋白能与患者血清中蒿属花粉特异性IgE结合,Mr为43000、38 000的蛋白条带结合率高.结论艾蒿花粉的主要变应原Mr分别为62 000、43000和38 000,青蒿花粉的主要变应原Mr分别为43000和38 000;2种花粉变应原组分存在很大相似性,但也有各自特异的变应原组分.
关键词： 青蒿花粉 艾蒿花粉 SDS-PAGE Western-blotting
