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表达前列腺特异性膜抗原的DNA疫苗对肿瘤细胞的抑制作用
目的构建表达前列腺特异性膜抗原(PSMA)的DNA疫苗,观察其在体外对肿瘤细胞的免疫攻击和在体内对肿瘤细胞攻击的免疫保护作用. 方法通过稳定转染构建表达PSMA的小鼠黑色素瘤细胞系B16-PSMA,将DNA疫苗pCDNA3.1-PSMA通过肌肉注射导入C57BL/6小鼠体内,分离小鼠脾细胞, 检测细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)反应.以B16-PSMA细胞攻击免疫后小鼠,观察免疫动物的无瘤生存期和肿瘤体积增长情况,评价DNA疫苗的抗肿瘤作用. 结果DNA疫苗可诱导小鼠脾淋巴细胞CTL活性,经过免疫后的小鼠成瘤率降低,无瘤生存期延长,肿瘤生长缓慢,肿瘤组织内有较多淋巴细胞浸润,表明产生较强的抗肿瘤反应. 结论表达PSMA的DNA疫苗能够诱导小鼠产生特异性免疫反应,对表达PSMA的肿瘤细胞的攻击产生免疫保护作用,为前列腺癌的预防和免疫治疗提供了新的思路.
关键词： 前列腺癌 前列腺特异性膜抗原(PSMA) DNA疫苗 -
人PSMA基因重组腺病毒的构建及其在树突状细胞上的表达
目的 构建含有人前列腺特异性膜抗原基因(prostate specific membrane antigen,PSMA)的重组腺病毒,并将其感染树突状细胞(dendritic cell,DC)后检测其在DC上的表达.方法 设计一对含有SfiⅠ酶切位点的PSMA基因上下游引物,以质粒pCMV-SPORT6/PSMA为模板,通过PCR扩增获得PSMA基因序列.片段回收、酶切处理,连接到穿梭质粒pShuttle-CMV-EGFP上,获得重组穿梭质粒pShuttle-EGFP-PSMA.经SfiⅠ酶切、PCR及插入片段测序鉴定正确后,将其用I-CeuI和I-SceI双酶切处理,转移至pAdxsi 载体上,得到pAdxsi-GFP-PSMA 病毒质粒,线性化后经HEK293 细胞包装成复制缺陷型腺病毒Ad-PS-MA-GFP;感染从健康志愿者外周血来源的DC,荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,Western blot检测PSMA基因在DC上的表达.结果 成功构建含有人PSMA基因的重组腺病毒,病毒滴度为2×1010 pfu/mL.构建好的Ad-PSMA-GFP可以在DC上高效和正确地表达.结论 人PSMA重组腺病毒载体的成功构建及其在DC上的表达,为下一步研究奠定了基础.
关键词： 腺病毒 前列腺特异性膜抗原(PSMA) 树突状细胞 DC疫苗 -
PSMA在前列腺癌组织中的表达及意义
目的 探讨前列腺特异性膜抗原(PSMA)在前列腺癌中的表达及其与临床特征的关系,为临床预测前列腺癌的转移潜能及预后、指导治疗提供客观有效的指标.方法 采用免疫组化S-P法检测PSMA在前列腺癌、前列腺增生及正常前列腺组织中的表达情况.结果 PSMA在前列腺癌组织中的表达高于前列腺增生组织;年龄≥60岁、分化程度低及有淋巴结转移的PSMA表达明显高于年龄＜60岁、分化程度高及无淋巴结转移者(P＜0.05,P＜0.001).结论 PSMA在前列腺癌组织中有高表达且其与年龄、组织分化程度及淋巴结转移明显有关.
关键词： 前列腺癌 前列腺增生 前列腺特异性膜抗原(PSMA) 免疫组织化学 -
人源性抗前列腺特异性膜抗原单链抗体的表达及活性鉴定
目的 构建人源性抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)单链抗体(scFv)的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化后,对其生物学活性进行鉴定.方法 将人源性抗PSMA scFv的基因克隆入原核表达载体pET302,将其转化入大肠杆菌BL21后用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,摸索不同诱导条件使scFv呈可溶性表达,经SDS-PAGE和Western blot法确认表达后,利用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白.利用流式细胞术检测scFv与PSMA阳性和阴性细胞的结合情况.结果 成功构建人源性抗PSMA scFv的原核表达载体;在30℃、IPTG终浓度为0.05 mmol/L时,可实现目的蛋白的可溶性表达;经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后获得纯度较高的抗PSMA scFv蛋白;流式细胞术结果显示该scFv可与PSMA阳性的LNCaP前列腺癌细胞特异性结合,而不与PSMA阴性的PC-3细胞结合.结论 在大肠杆菌成功表达了可溶性人源性抗PSMA scFv,获得的抗PSMA scFv能够特异性地与PSMA阳性前列腺癌细胞结合.
关键词： 前列腺特异性膜抗原(PSMA) 单链抗体 原核表达 前列腺癌 -
针对前列腺特异性膜抗原的抗体靶向治疗研究进展
前列腺特异性膜抗原(PSMA)是一种2型跨膜糖蛋白,它特异性地表达于前列腺上皮细胞,是一种前列腺特异性标志物.PSMA在前列腺癌组织中的表达显著上调,且其表达水平与肿瘤的恶性程度及患者的生存密切相关.此外,PSMA也特异性地表达于多种肿瘤的新生血管内皮细胞.这些特点使得PSMA成为一种理想的肿瘤治疗靶点,以PSMA为靶点的肿瘤靶向治疗研究发展迅速,其中基于抗体的抗肿瘤策略如抗体偶联药物、免疫细胞治疗及免疫放射治疗等取得了显著的进展,证实了PSMA作为抗肿瘤靶点的可行性和有效性.本文就PSMA的结构和功能及针对PSMA的基于抗体的抗肿瘤治疗策略进行了总结.
关键词： 前列腺癌 前列腺特异性膜抗原(PSMA) 靶向治疗 抗体 综述
