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嵌合人偏肺病毒表位的重组流感病毒毒株的构建
目的 构建和拯救重组嵌合表达人偏肺病毒(human metapneumovirus,hMPV)表位的流感病毒株.方法 将通过生物信息学软件预测的hMPV B细胞表位、CTL表位和Th表位串联为不同表位组合,将其表位蛋白基因分别插入A/PR/8/34(PR8)流感病毒非结构蛋白NS1基因,利用8质粒系统共转染293T/MDCK细胞,拯救重组流感病毒毒株,全基因组测序鉴定重组流感病毒.同时测定重组病毒的血凝素(HA)活性和半数细胞感染量(TCID50)及生长曲线.结果 在hMPV不同表位间引入间隔序列GPGPG和KK,构建串联多表位抗原,将该抗原基因插入PR8流感病毒非结构蛋白NS基因,经反向遗传学成功拯救出3株重组流感病毒毒株.经MDCK细胞传代3次,鸡胚传代1次,3株重组流感病毒毒株增殖稳定.流感病毒全基因组测序证实,重组的3株流感病毒毒株分别嵌入了hMPV的B细胞表位、CTL表位/Th细胞表位和B细胞表位/Th细胞表位,命名为rFLU/hMPV/B、rFLU/hMPV/CTL-Th、rFLU/hMPV/B-Th.HA滴度分别为128、128、256,TCID50分别为107.0/ml、106.8/ml和107.0/ml.生长曲线试验结果表明重组流感病毒毒株可在MDCK细胞中有效复制.结论 成功拯救出3株嵌合有hMPV B细胞表位、CTL表位/Th细胞表位和B细胞表位/Th细胞表位的重组流感病毒株,为后续评价该重组病毒株的免疫效果及是否有潜在疫苗应用价值提供实验资料.
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携带肠道病毒71型中和线性表位重组流感病毒的构建
目的 获得能够携带肠道病毒71型(EV71)中和线性表位的重组流感病毒.方法 通过PCR方法,在流感病毒HA基因中插入EV71中和线性表位序列,获得重组质粒；进行反向遗传学操作,构建重组流感病毒.结果 获得了2个重组质粒pPolⅠ/Ⅱ/WSN-HA-SP55和pPolⅠ/Ⅱ/WSN- HA-SP70,并构建了能够分别携带EV71中和线性表位SP55和SP70的2株重组流感病毒,重组病毒3次传代血凝效价都保持在27和25HAU,具有较好的稳定性.结论 通过反向遗传学操作,构建出携带EV71中和线性表位的重组流感病毒,为研制预防手足口病重组流感病毒载体疫苗奠定基础.
