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中性粒细胞杀菌活性试验检测高毒力肺炎克雷伯菌毒力的研究
目的 利用中性粒细胞杀菌活性试验,检测毒力基因rmpA、rmpA2阳性和拉丝试验阳性的高毒力肺炎克雷伯菌抗中性粒细胞杀菌能力,验证该试验鉴定高毒力肺炎克雷伯菌的可行性.方法 收集浙江省2016年1月至2017年7月期间临床血流感染分离的150株非重复肺炎克雷伯菌.采用PCR检测碳青霉烯类抗生素耐药基因(blaKPC,blaNDM,blaIMP-1,blaIMP-2)、荚膜血清型(K1,K2,K5,K20,K54,K57)和毒力基因(rmpA,rmpA2,iucA,iroN).将拉丝试验阳性和毒力基因rmpA、rmpA2阳性的菌株定义为高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP),拉丝试验和毒力基因rmpA、rmpA2阴性的菌株定义为经典肺炎克雷伯菌(cKP).采用中性粒细胞杀菌活性试验检测肺炎克雷伯菌的毒力,细菌的存活率计算方式为:加中性粒细胞共孵育的实验组菌落形成单位(CFU)/不加中性粒细胞共孵育的对照组CFU.结果 150株肺炎克雷伯菌中检测到65株携带rmpA2毒力基因,占43.3％.在rmpA2阳性菌株中,rmpA、iroN、blaKPC和K2的检出率分别为73.8％、80.0％、75.4％和40.0％,拉丝试验阳性率为36.9％;中性粒细胞杀菌试验中,hvKP组菌株和cKP组菌株的存活率分别为0.866±0.056和0.368±0.058,两组存活率差异有统计学意义(P<0.001).结论 分离自浙江省携带rmpA、rmpA2毒力基因和拉丝试验阳性的hvKP经中性粒细胞处理后仍有非常高的存活率,中性粒细胞杀菌活性试验阳性,该试验是一个鉴定肺炎克雷伯菌毒力简单有效的方法.
