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B7-H3信号对不同活化状态T细胞产生免疫应答的差异性研究
目的 探讨B7-H3分子对不同活化状态T淋巴细胞增殖和相关细胞因子分泌的影响.方法 采用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC)并从中分选纯T细胞,体外给予CD3/CD28单抗共刺激培养,采用流式细胞分析技术观察不同刺激时间点T细胞表型CD28和CTLA-4的变化,分析T细胞活化状态.在此基础上,于CD3/CD28单抗预刺激第0、1、2、3、4天加入人B7-H3-Fc融合蛋白及同型对照Hu-Fc融合蛋白混合共培养,采用CCK-8法检测各组T淋巴细胞增殖情况;ELISA法检测细胞因子(IL-2、IL-10及IFN-γ)分泌水平,分析不同活化状态T细胞接受B7-H3信号刺激后是否产生不同免疫应答.结果 在静息状态下,B7-H3信号可以显著抑制T细胞分泌IL-2和IL-10,对IFN-γ分泌则无显著影响;随着T细胞活化,B7-H3信号可显著促进T细胞分泌IL-2和IFN-γ,对IL-10分泌则无显著影响.细胞增殖实验结果显示B7-H3分子可抑制PBMCs中T细胞的体外增殖,对纯T细胞则无显著影响.结论 B7-H3分子对T细胞免疫功能的调节可随T细胞活化状态不同而改变.
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小鼠B7-H3对T细胞的体外正性协同刺激作用
小鼠B7-H3作为协同刺激分子的生物学功能至今尚未明确.本文拟通过构建小鼠B7-H3基因的真核表达载体,获取稳定表达小鼠B7-H3基因的细胞株,并进一步通过体外实验研究其对T淋巴细胞体外活化及功能的调节作用.作者运用RT-PCR技术从小鼠肝脏组织中获得全长小鼠B7-H3基因,并构建真核表达载体pIRES2-B7-H3,转染仓鼠细胞株(CHO).经过G418抗性筛选和亚克隆,获得稳定表达B7-H3的基因转染细胞,并经RT-PCR、Western-blot及流式细胞术方法鉴定细胞的表达,采用CCK8、酶联免疫吸附试验(ELISA)等方法分析基因转染细胞对T细胞的增殖和IL2、IFN-γ的分泌.本文成功克隆和构建了稳定表达小鼠B7-H3的基因转染细胞B7-H3/CHO,该细胞株和T细胞共培养能有效促进T细胞的增殖,增强其IL-2、IFN-γ的分泌.小鼠B7-H3在T细胞活化过程中可能发挥正性协同作用.
