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稻瘟病毒文献资料
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稳定分泌重组HBV载体颗粒细胞系的构建
目的 制备一个持续分泌表达杀稻瘟菌素抗性基因(BsdR)的重组乙型肝炎病毒细胞系.方法 删除HBV质粒中各基因的表达,在S基因区插入目的 基因BsdR,以构建载体质粒pCH-BsdR;具有G418抗性的无包装信号的HBV辅助质粒pcDNA3.1-CH3142与载体质粒共转染HepG2细胞,经G418和Bsd共筛选,获得细胞克隆,进行系列检测.结果 挑选36个细胞克隆,经检测,终筛选出3个细胞株,具有形成松弛环状DNA的能力,细胞培养上清液中病毒定量分别为4.1×106、3.6×106、1.2×106拷贝/ml.观察到有囊膜的重组HBV颗粒的形成.未检测到野生型HBV的产生.结论 该细胞系能够大量制备重组HBV载体颗粒,有助于HBV载体在基因治疗方面的应用和易感细胞系的筛选.
