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人血清中寨卡病毒微量中和抗体检测方法的建立和应用
目的 建立人血清寨卡病毒(ZIKV)微量中和抗体检测方法,并用10例经核酸检测和/或病毒分离确诊的寨卡输入病例的急性期和恢复期血清样本进行分析验证.方法 采用分离自输入寨卡病例的寨卡病毒株开展组织培养微量中和抗体测定,在BHK21、VERO和VERO-E6 3种细胞系中选择感染寨卡病毒后能产生典型CPE的细胞系制备病毒储备液,滴定病毒滴度;使用100TCID50的病毒液与连续4倍稀释的经56℃ 30 min灭活的血清于37℃中和2h,然后加入细胞悬液.5％二氧化碳培养箱孵育,逐日观察CPE.结果 BHK21、VERO和VERO-E63种细胞系对寨卡病毒感染的敏感度不同,其中VERO细胞为敏感,可出现典型的CPE;应用VERO细胞系建立寨卡病毒微量中和抗体检测方法能准确反映寨卡确诊病例急性期和恢复期血清中和抗体水平,并能作为一种特异性诊断方法.结论 寨卡病毒微量中和抗体检测方法不仅可用于人感染寨卡病毒的实验室诊断,还可用于人群血清流行病学调查.
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表达犬CD150的Vero细胞系的建立
目的 建立表达CD150基因的非洲绿猴肾细胞系Vero-CD150,提高犬瘟热病毒的分离效率.方法 分离健康犬血液中的白细胞,并克隆编码CD150的基因,构建真核表达质粒pIRES-CD150,将该质粒转染Veto细胞系.经过克隆化筛选获得Vero-CD150细胞系.利用RT-PCR、流式细胞仪(FCM)进行鉴定,同时对临床检测为阳性的自然发病犬,取肝、肺、脾脏等脏器为病料,接种于Vero-CD150细胞系.结果 RT-PCR和流式细胞仪皆检测到CD150在Vero细胞中能够稳定表达;与Veto细胞系相比,Vero-CD150细胞系的生长特性相似;接种病料后,感染细胞不仅产生明显的细胞病变,且用RT-PCR可检测到病毒核酸.结论 本试验使CD150基因能在体外转入正常的非洲绿猴肾细胞系Vero中,获得稳定表达CD150基因的Vero细胞亚克隆,并使后者结合CDV的能力明显增强.该细胞系的建立,为更有效的分离犬瘟热病毒打下了基础,可用于进一步研究.
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pEGFP-ORF2质粒在Vero细胞中的有效表达
目的:确立pEGFP-ORF2质粒在不同细胞密度,不同转染时间,及血清存在与否时在细胞中的有效表达,为进一步研究HSV-2LAT ORF2对细胞的作用,及阐明HSV-2潜伏复发机制打下基础.方法:采用脂质体法将pEGFP-ORF2与pEGFP-C2两个真核表达载体转染Vero细胞,观察荧光蛋白表达.结果:有无血清对转染效果无明显差异.在细胞密度为4.0×104cells/ml,转染后84h EGFP表达量较其它条件下高,且在相同条件下pEGFP-ORF2与pEGFP-C2的表达无明显差异.结论:血清对表达效果的影响不大,细胞的接种密度及转染时间对转染有明显作用,以荧光蛋白作为标签鉴定蛋白表达的方法切实可行.
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流感病毒在Vero细胞系与MDCK细胞系增殖条件的比较
目的 研究流感病毒H1N1及其他亚型在Vero细胞系和MDCK细胞系高效增殖的适条件,比较两种细胞系对流感病毒的敏感性差异及影响敏感性差异的条件.方法 在培养好的Vero细胞系与MDCK细胞系用不同的病毒感染复数(M.O.I)、胰酶浓度、病毒吸附时间、病毒维持液血清质量浓度等条件进行流感病毒在细胞上的增殖.结果 在M.O.I为0.01接种流感病毒,吸附时间为1h,胰酶质量浓度2μg/mL,血清质量浓度为8％时,流感病毒血凝素在MDCK细胞系可获得较高的滴度.结论 MDCK细胞系是适于流感病毒培养的细胞,它作为生产新型流感病毒疫苗的主要细胞基质需要进一步的研究.
