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蛋白质结构四级文献资料
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Tat融合蛋白表达载体TAT-KLF4的克隆化及蛋白表达研究
目的 构建重组表达载体TAT-KLF4,在E.coli BL21中高效表达并纯化融合蛋白.方法 经PCR获得编码人KLF4的开放读码框基因序列,酶切并连接到原核表达载体PET-28b-TAT-V2上,得到重组表达载体TAT-KLF4,转化大肠埃希菌,IPTG诱导TAT-KLF4融合蛋白的表达.表达产物用SDS-PAGE鉴定,亲和层析柱纯化融合蛋白,并应用Western Blot检测蛋白的特异性,应用免疫荧光检测融合蛋白转导HSF细胞的效果.结果 成功构建了TAT-KLF4融合蛋白的原核表达载体,在诱导下获得了高效表达并纯化了融合蛋白,Western Blot实验提示获得了特异性的融合蛋白.免疫荧光提示融合蛋白可快速转导入HSF细胞内.结论 为通过蛋白转导方式诱导多能干细胞提供了物质基础.
