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卵石区形成细胞文献资料
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人胚AGM区造血干/祖细胞的分离及其在含AGM区基质细胞体系中的培养
本研究分离人胚主动脉-性腺-中肾(AGM)区遣血干/祖细胞(HSPC)并在含人AGM区基质细胞的培养体系中进行培养,以了解人AGM区基质细胞对HSPC的作用.以免疫组织化学方法检测人胎龄28-45天胚胎AGM区细胞CD34、Flk-1、VEGF的表达;分离AGM来源的HSPC,通过直接接种和经Transwell非直接接触两种方法接种于含人AGM区基质细胞系(hAGMS3和hAGMS4)饲养层的培养体系,观察HSPC生长情况和卵石区形成细胞(cobblestone area-forming cells,CAFC)并计数卵石区(cobblastone area,CA);用间接免疫荧光方法检测培养体系中悬浮细胞和CAFC的CD34、Flk-1表达;收获细胞进行半固体造血集落培养以检测两种培养方法对AGM-HSPC的集落形成能力影响.结果表明:人AGM区造血细胞表达CD34和Flk-1.两种接种方法均显示有CFC形成.直接接触培养能形成CD34和Flk-1双阳性的CAFC,集落总数明显高于非接触培养(hAGMS3体系:1 647±194 vs 389±31,P＜0.05;hAGMS4体系:1 586±75 vs 432±35,P＜0.05).结论:1人胚AGM区含有CD34+Flk-1+的HSC.2首次建立含人胚AGM基质细胞的AGM-HSPC培养体系,直接接触培养和非直接接触培养均能促进AGM-HSC的生长,AGM基质细胞与HSC直接接触发挥重要作用.
关键词： 永久造血 主动脉-性腺-中肾区 造血干细胞 基质细胞 卵石区形成细胞
