您当前的位置:
首页 > 文献资料
所属专业:
变异体二氢叶酸还原酶文献资料
-
重组变异体二氢叶酸还原酶和绿色荧光蛋白腺相关病毒载体的构建及外源基因表达
构建携带变异体二氢叶酸还原酶(mDHFR)和绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的重组腺相关病毒(AAV)载体,并使其在NIH3T3细胞中表达,观察NIH3T3细胞的耐药性变化.先分别扩增mDHFR和GFP基因片段,并用甘氨酸接头以PCR的方法将其连接在一起,插入T载体,酶切后插入AAV载体,包装成病毒后感染NIH3T3细胞,通过PCR、荧光显微镜和流式细胞术对融合基因的表达进行观察.结果:PCR检测到NIH3T3细胞DNA基因组中mDHFR和GFP cDNA,荧光显微镜和流式细胞仪观察到绿色荧光蛋白表达的比率约为25%,MTT法检测转基因组对MTX的耐药性增强.结论:AAV载体可以将mDHFR和GFP融合基因导入NIH3T3细胞并成功表达,使其对MTX的耐药性增强,为mDHFR基因和AAV载体在基因治疗中的应用提供了理论依据.
关键词: 腺相关病毒 变异体二氢叶酸还原酶 绿色荧光蛋白 载体构建 基因表达 -
腺相关病毒与变异体DHFR和GFP重组载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达
全身化疗仍然是目前治疗恶性肿瘤的主要手段之一,而化疗对骨髓造血的抑制严重影响治疗肿瘤的疗效.将耐药基因导入造血干细胞可以保护机体的造血,从而提高对化疗敏感肿瘤患者对化疗药物的耐受性,增大化疗药物的剂量,缩短化疗间隔时间提高疗效.
关键词: 腺相关病毒 变异体二氢叶酸还原酶 绿色荧光蛋白 基因转染