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人类血小板抗原HPA-15系统PCR-SSP基因分型技术的建立
本研究目的是采用PCR-SSP技术建立人类血小板抗原HPA-15系统的基因分型方法,并应用于血小板供者库的HPA基因定型.采用第11届国际输血协会(ISBT)血小板血清学与基因分型协作组推荐的序列特异性引物,调节引物浓度、Mg2+离子浓度和探索佳PCR扩增条件,建立HPA-15系统基因分型技术.该分型技术的准确性和可靠性,采用第11届ISBT血小板协作组提供的质控样本进行验证,同时采用本研究合成的引物及商品化试剂盒,对50名随机的汉族血小板捐献者进行HPA-15系统基因分型,作为平行对照.应用本研究的方法,对第11届ISBT送检的10份考核样本进行基因分型.结果表明:基因分型结果与ISBT公布的结果完全一致.50名随机的血小板志愿捐献者,经本研究的方法及美国G&T公司的试剂检测,基因分型的结果相符合;观察到的基因频率:HPA-15a和-15b分别为0.5100和0.4900.结论:本研究建立的HPA基因分型技术具有简便、快速、准确的特点,适合于常规HPA基因分型,具有广泛的应用前景.
关键词： 人类血小板抗原 HPA-15系统 序列特异性引物-PCR 基因分型 -
两种不同的KIR基因分型方法的对比研究
目的 探讨常用的序列特异性引物-PCR(PCR-SSP)及流式序列特异性寡核苷酸探针(Flow-rSSO)杂交方法在杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)框架基因分型结果中的符合率和准确性.方法 随机选择2011年6月77例深圳造血干细胞捐献者的外周血样,分别用PCR-SSP及Flow-rSSO商品化试剂盒进行KIR框架基因定型,分别通过凝胶电泳图及HLA Fusion 2.0 Research软件分析法,分析结果的一致性.对初检结果不一致的样本,采用同一厂家、不同批号的商品化试剂盒进行复检,并采用美国国立卫生研究院癌症研究所KIR PCR-SSP方法进行检测.结果 77例样本中,75例完全一致,另2例(2.6％) KIR2DL2的结果不一致,PCR-SSP方法对KIR 2DL2的初检、复检检测结果均为阴性,但用Flow-rSSO Lot#004批号试剂盒检测结果为阳性.更换新的Flow-rSSO Lot# 005批号试剂盒复检,结果与PCR-SSP方法的检测结果相一致.结论 为保证KIR基因分型的准确性,开展KIR基因分型的室内、室间质控工作至关重要.
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常见ABO抗原和稀有A2抗原同步基因分型的研究
目的 建立人类ABO血型系统的同步基因分型法研究ABO血型.方法 采用PCR-SSP技术,设计合成13对序列特异性引物,摸索佳退火温度,通过调整引物浓度、Mg2+浓度等,使ABO系统等位基因在同一条件下进行同步扩增和扩增产物在同一凝胶中进行同步电泳;使用此方法,检测34例已知血清学ABO血型的与20例已知序列的A2亚型标本.结果 用基因分型法检测出的ABO常见基因和A2基因,与已知血清学ABO分型结果相符合.结论 该ABO基因分型方法适合中国人ABO基因常规鉴定与研究.
关键词： ABO血型 人类A2亚型 基因分型 序列特异性引物-PCR -
中国白族、佤族和拉祜族人群MBL基因启动子区SNP的研究
目的: 研究中国白族、佤族和拉祜族人群甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因启动子区单核苷酸多态性(SNP).方法: 抽提人外周血白细胞基因组DNA, 建立SSP-PCR及PCR-分子灯塔实时分析技术,检测MBL基因启动子区SNP位点-550(G/C,称H/L等位基因)、-220(G/C, X/Y等位基因)和+4(C/T,P/Q等位基因),分析其单倍型及基因型频率.结果: 从71例白族、73例佤族和94例拉祜族人中, 分别检出等位基因型LYP/LYP 4例(5.6%)、4例(5.5%)和2例(2.1%); HYP/LYQ 6例(8.5%)、11例(15.1%)和12例(12.8%); LYP/LYQ 21例(29.6%)、14例(19.2%)和51例(54.3%); LXP/LXP 1例(1.4%)、2例(2.7%)和0例; LYQ/LYQ 10例(14.1%)、14例(19.2%)、7例(7.4%); LXP/LYQ 10例(14.1%)、 13例(17.8%)和15例(16.0%); HYP/LYP 4例(5.6%)、3例(4.1%)和4例(4.3%); HYP/LXP 3例(4.2%)、1例(1.4%)和0例; HYP/HYP 12例(16.9%)、11例(15.1%)和3例(3.2%).结论: 中国白族、佤族、拉祜族普通人群之间,MBL基因启动子区等位基因L/H的分布存在差异(P<0.01), X/Y和P/Q无统计学意义的差异(P>0.05); 各单倍型和各基因型的分布存在差异(P<0.01); 基因型LYP/LYQ和LXP/LYQ在3个民族均有较高的分布,其总体频率分别达36.1%及16.0%.
