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问号钩端螺旋体mce基因及其编码蛋白特征的初步分析
目的 建立基于mce基因的PCR检测方法,分析问号钩端螺旋体(钩体)mce基因保守性,获得钩体mce基因生物信息学分析结果.方法 以NCBI/Blast、NCBI/Cds软件搜索Mce内部存在的保守功能结构域及mce基因的特异性；采用TMHMM Server-2.0预测所编码蛋白跨膜区结构；根据已报道问号钩体赖株mce基因设计引物,采用PCR扩增问号钩体赖株全长mce基因,测序并使用DNAStar软件进行测序结果比对.以13株国内流行问号钩体菌株基因组DNA为模板,对基于mce基因PCR检测方法进行验证.扩增产物进行测序、比对,同时根据推定的氨基酸序列做系统发生树.结果 生物信息学研究表明,Mce含有与病原菌黏附侵袭相关的Mce超家族保守功能结构域；Mce中存在一明显的跨膜结构；同时,mce基因特异存在于问号钩体中；所克隆的mce基因与已报道序列(GenBank accession No.:NP_712236)一致；PCR检测结果表明,我国13株问号钩体株均携带mce基因；核苷酸和氨基酸序列相似性均＞95％.结论 问号钩体mce基因特异、保守存在于各致病性的问号钩体中；Mce具有明显的跨膜结构并含有Mce超家族结构域,与问号钩体黏附侵袭宿主细胞有关.
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日本血吸虫无机焦磷酸酶的克隆表达及蛋白特征分析
目的克隆并原核表达日本血吸虫无机焦磷酸酶(SjIPP),分析SjIPP的蛋白特征。方法以日本血吸虫成虫cDNA为模板,克隆SjIPP,重组入pET28a质粒,并将重组质粒转化入E. coli BL21,用SDS-PAGE和Western blot法鉴定重组蛋白的表达和特异性,进一步分析SjIPP的蛋白特征和同源性。结果克隆和表达出的SjIPP均与预测的分子量大小一致,Western blot法结果显示,重组蛋白可被小鼠抗His-tag单克隆抗体特异性识别。生物信息学分析表明,SjIPP为胞内蛋白,含有多个磷酸化位点,B细胞表位丰富,且与人和小鼠的IPP高度同源。结论成功克隆表达出SjIPP,为进一步利用SjIPP奠定基础。
关键词： 日本血吸虫 无机焦磷酸酶(EC3.6.1.1) 克隆 蛋白特征 -
A-超家族芋螺毒素研究进展
芋螺毒素是一类芋螺毒液管和毒囊内壁的毒腺所分泌的活性多肽,能特异地作用于电压门控离子通道(Na+、K+、Ca2+)、配体门控离子通道(nAChRs、5-HT3R、NMDAR)、G蛋白偶联受体(神经降压素和血管加压素)和神经递质转运蛋白,已在神经科学领域和新药研制方面受到广泛关注.目前据其信号肽的保守性,将芋螺毒素分为26个超家族.其中A-超家族是研究较多的超家族之一,其作用靶标主要是乙酰胆碱受体,对疼痛、成瘾、抑郁症、帕金森综合症、老年痴呆症、多发性硬化症、癫痫、中风、肌无力等具有潜在的药用价值.本文就A-超家族芋螺毒素的基因结构、蛋白特征、功能等方面的研究进展进行综述.
