首页 > 文献资料
-
调节性T细胞在肝再生增强因子免疫抑制机制中的作用研究
目的 观察人肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR)对体外活化的单个核细胞中调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的增殖、分化及抑制性细胞因子TGF-β1、IL-10表达水平的影响,探讨ALR的免疫抑制机制.方法 梯度离心分离正常人外周血单个核细胞(human peripheral blood monoclear cells,PBMCs),分为对照组(Control组)、ConA刺激组(ConA组)和人ALR (hALR)干预组(ConA+ hALR组).ConA组和ConA+ hALR组分别给予ConA(5μg/mL)和hALR(30μg/mL)处理,对照组不处理.各组作用60h后,2-对磺酸基苯基-3..(4,5-二甲基噻唑)-5-(3-羧甲氧基苯基)-二氢四唑嗡盐[3-(4,5-dimethyhhiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,inner salt,MTS]检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组CD4+ CD25+ FoxP3+ Treg细胞比例和细胞周期变化,Real-time PCR检测各组FoxP3 mRNA的表达,ELISA检测各组上清中细胞因子TGF-β1、IL-10浓度.结果 hALR能明显抑制ConA活化的PBMCs的增殖(P＜0.01);与ConA组和Control组相比,hALR能显著增加CD4+ CD25+ FoxP3+ Treg细胞占CD4+T细胞的比例(P＜0.01)和FoxP3 mRNA的表达(P＜0.01),并且hALR能够解除ConA引起的Treg细胞周期G2/M期的阻滞(P＜0.01).此外,与ConA组和Control组相比,ConA+ hALR组上清中TGF-β1和IL-10的浓度明显升高(P＜0.01).结论 hALR可以通过诱导Treg细胞的增殖、分化以及促进TGF-β1和IL-l0的产生,从而达到免疫抑制的作用.
-
人肝再生增强因子对体外单个核细胞PKCα-NF-κB及IL-2的影响
目的 观察人肝再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,hALR)对人外周血单个核细胞(periph-eral blood mononuclear cell,PBMC)PKCα-NF-κB及IL-2的影响,探讨hALR免疫抑制机制.方法 用梯度离心法分离正常人PBMC,分成正常对照组、刀豆蛋白A(ConA)刺激组(ConA组)和hALR干预组(ConA+hALR组).ConA组用5μg/mlConA刺激细胞增殖和分泌细胞因子IL-2;ConA+hALR组用30μg/ml hALR对ConA刺激进行干预.于细胞培养0、8、16、32、40 h时,用MTT法测定细胞增殖程度,Weston blot检测细胞内信号通路PKCα-NF-κB表达含量,Fluo-3AM装载检测胞内钙离子浓度,用双抗夹心酶联法检测上清细胞因子IL-2含量.结果 ConA组细胞增殖逐渐加强,16 h时与正常对照组比较具有统计学意义(P<0.05);PKCα、NF-κB表达上调及上清IL-2含量增加趋势一致,在16 h达到高峰(P<0.05).ConA+hALR组细胞没有增殖,PKCα-NF-κB表达及上清IL-2含量高峰后移至32 h.每个时间点各组细胞内Ca2+浓度没有差别.结论 hALR可能通过抑制PKCα-NF-κB通路阻碍IL-2的产生速度进而抑制免疫.
关键词： 人肝再生增强因子 外周血单个核细胞 PKCα-NF-κB IL-2
