首页 > 文献资料
-
亚洲带绦虫成虫钙调神经磷酸酶B基因的克隆和生物信息学分析
目的 从亚洲带绦虫(Taenia asiatica) 成虫cDNA 文库中克隆亚洲带绦虫成虫钙调神经磷酸酶B基因(calcineurin B),并分析和预测其编码蛋白的结构和功能.方法 构建亚洲带绦虫成虫cDNA 质粒文库,从文库中识别钙调神经磷酸酶B基因并进行生物信息学分析和登录.结果 该基因登录号为ABN14963.1,是全长基因,长度747 bp,编码区为56～563,编码169个氨基酸;无跨膜区,蛋白的理化性质稳定;含有4 个"EF-hand"Ca2 + 结合区域;与GenBank中日本血吸虫同源基因的一致性达90%,相似性达95%;预测3个主要的抗原表位99～104、20～25、23～28在钙调神经磷酸酶B蛋白空间结构的分子表面.结论 应用生物信息学方法从亚洲带绦虫成虫cDNA文库中筛选出一个钙调神经磷酸酶B基因.
关键词： 亚洲带绦虫 钙调神经磷酸酶B基因 cDNA 生物信息学 -
亚洲牛带绦虫钙调神经磷酸酶B基因的原核表达和免疫学分析
[目的]对亚洲牛带绦虫钙调神经磷酸酶B基因(CaN)进行克隆、表达和免疫学初步研究.[方法]将亚洲牛带绦虫成虫钙调神经磷酸酶B基因克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析.[结果]PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-30a(+)-Ta CaN构建成功.SDS-PAGE结果表明目的基因能在大肠杆菌BL-21/DE3中表达,经亲和层析得到了纯化重组蛋白.重组蛋白能被感染了亚洲牛带绦虫的猪和患者的血清识别.[结论]亚洲牛带绦虫成虫钙调神经磷酸酶B基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的表达.为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.
关键词： 亚洲牛带绦虫 钙调神经磷酸酶B基因 基凶克隆 原核表达
