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牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a辅助蛋白AP2基因的克隆及序列分析
目的 克隆牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿P卜2a辅助蛋白AP2基因,并进行序列分析. 方法 根据Gen-Bank公布的牛源无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a的AP2基因序列,使用生物信息学软件Primer5.0设计1对特异性引物,以内蒙古东部地区乳源无乳链球菌临床菌株总DNA为模板,扩增AP2基因片段. 结果 扩增的AP2基因经克隆测序,长度为699 bp,其序列与GenBank上公布的牛源无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a的AP2基因(EU930008)相似性为99.57%,编码233个氨基酸残基,有2个核苷酸出现突变,但是氨基酸序列没有发生改变,属于无意义突变. 结论 成功克隆出内蒙古东部地区牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿AP2基因,为进一步研究AP2基因编码蛋白的抗原性奠定了基础.
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aP2增强子和启动子荧光素酶基因载体的构建及鉴定
目的 构建aP2基因增强子和启动子驱动虫荧光素酶表达的真核表达载体,为进一步研究aP2基因表达调控机制及其信号转导通路等莫定基础.方法 提取小鼠肝脏基因组DNA,PCR扩增aP2增强子和启动子,并将其与虫荧光素酶报告质粒PGL3-Basic连接,通过测序鉴定.结果 小鼠aP2基因的增强子和启动子正确插入虫荧光素酶真核表达载体,测序结果与GENEBANK报道序列一致.结论 aP2基因增强子和启动子驱动虫荧光素酶表达的真核表达载体构建成功.