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2.2kb乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白对Huh7细胞基因表达的影响
目的 研究单剪接及双剪接型2.2 kb乙型肝炎病毒基因编码剪接特异性蛋白(分别为TPss及TPds)对Huh7细胞基因表达的影响,探讨其可能的致病机制.方法 PCR扩增TPss及TPds编码序列并克隆入pcDNA3.1/HisC.采用FuGENE6将重组表达载体及相应空载体分别瞬时转染Huh7细胞,Trizol抽提细胞总蛋白与总RNA.以Western blot检测目的蛋白的表达,通过Affymetrix Genechip U133 plus 2.0人类基因表达谱芯片检测Huh7肝细胞基因转录的变化并以半定量RT-PCR进一步验证. 结果 成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1/HisC-TPss及pcDNA3.1/HisC-TPds,在Huh7细胞中能分别表达TPss(单剪接)及TPds(双剪接)蛋白.TPss蛋白导致Huh7细胞DGKβ(diacylglycerol kinase beta )等4个基因转录上调,ZNF652( zinc finger protein 652)等5个基因转录下降;TPds蛋白导致细胞MTSS1( Metastasis suppressor 1)等3个基因转录上调,WARS2基因(Tryptophanyl tRNA synthetase 2)转录下降. 结论 2.2 kb乙型肝炎病毒基因组剪接体编码剪接特异性蛋白可能影响肝细胞骨架的重塑、细胞内物质代谢等方面,与肝细胞的增生、迁移及代谢异常密切相关.
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458nt～1308nt乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白对Huh7细胞基因表达的影响
目的 研究458nt～1 308nt乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白TSR'r'对Huh7细胞基因表达的影响,探讨其可能的致病机制. 方法 PCR扩增TSR'r'编码序列并克隆人pcDNA3.1/HisC.以FuGENE6将重组表达载体及相应空载体分别瞬时转染Huh7细胞,Trizol抽提细胞总蛋白与总RNA;以融合表达多肽表位抗体为一抗,Western blot检测目的 蛋白的表达;用Affymetrix Genechip U133 plus 2.0人类基因表达谱芯片检测Huh7肝细胞基因转录的变化,并以半定量RT-PCR进一步验证. 结果 成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1/HisC-TSR'r',转染48 h后在Huh7细胞中表达TSR'r'蛋白.TSR'r'导致Huh7细胞载脂蛋白H等27个基因转录上调,其中包括5种代谢相关基因,7种免疫相关基因,7种胶原及胞外基质基因,5种干扰素诱导蛋白基因;TSR'r'还导致Huh7细胞核受体共激活物1基因在内的7种基因转录下降. 结论 458nt～1308nt乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白可能多方面影响肝细胞功能,具有重要的致病意义.
