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恶性疟原虫GLURP基因的体外扩增,克隆及序列分析
通过体外扩增,克隆恶性疟原虫海南(FCCl/HN)株GLURP基因,测定其基因序列,了解该基因的结构及在FCCl/HN株与其它分离株间的序列差异.根据GLURP基因已知序列设计合成3对引物,用PCR技术从FCCl/HN株基因组DNA中扩增3个部分序列重叠的GLURP基因片段;并分别克隆入测序用PMD-18T载体.用双脱氧链末端终止法测定GLURP基因序列,应用软件辅助分析基因结构及进行同源性比较.恶性疟原虫FCCl/HN株GLURP基因全长3711bp,编码l 236个氨基酸.FCCl/HN株与F32株GLURP基因核苷酸序列同源性为96.27%;编码氨基酸序列同源性为95.78%.本文为继续进行FCCl/HN株GLURP抗原的免疫原性和保护性研究奠定基础.
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不同疟区恶性疟原虫地理株谷氨酸富有蛋白基因R2区序列分析及分型
[目的]测定云南与海南两省不同疟区恶性疟原虫分离株谷氨酸富有蛋白(GLURP)基因的部分序列及了解其分型.[方法]采用套式PCR方法特异性扩增GLURP基因R2区片段,并将该基因片段克隆于T载体,用双脱氧末端终止法测定不同长度的阳性克隆核苷酸序列,并应用DNAStar软件对云南与海南两省分离株GLURP基因及蛋白序列进行比较和分析.[结果]首次发现云南与海南两省恶性疟原虫至少存有7个大小不同的GLURP等位基因型虫株,其基因片段变化范围为600～1500bp.不同分离株的GLURP基因R2区具高度保守性,其由编码19～20个氨基酸的碱基的基本重复单位构成,该基因具有长度的多态性,表现在碱基基本重复单位的数目不同.序列分析结果表明,我国不同分离株之间或同一地区不同株之间GLURP基因及氨基酸序列具有高度的同源性,无明显的地理差异.[结论]不同分离株GLURP基因结构的高度保守性及碱基重复片段数目的多态性,对研究疫苗候选抗原和建立疟原虫基因分型方法具有一定理论价值.
