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我国恶性疟原虫裂殖子表面蛋白MSP-2的抗原表位分析
根据我国恶性疟原虫株MSP-2基因序列,检索我国虫株MSP-2是否具有国外已鉴定的MSP-2抗原表位.结果显示,我国虫株MSP-2具有已鉴定的FC-27等位基因型可变区抗原表位STNS和DTPTATE.同时应用计算机辅助抗原表位分析技术对MSP-2进行抗原表位分析预测,并以合成肽技术鉴定了预测表位的免疫原性.抗原指数分析表明,MSP-2分子亲水性指数和侧链易曲性指数高的区域分别位于aa153～166和aa65～72 而aa53～60可能是我国虫株特异的抗原表位.用4个合成肽进行免疫学鉴定,证实预测的表位可以诱导抗肽抗体反应,免疫血清可识别重组MSP-2和恶性疟原虫全抗原中MSP-2抗原区带,且合成肽可与我国流行区高度免疫人群免疫血清反应.由于这些表位存在于我国海南、云南、安徽株MSP-2序列中,可以作为研制我国恶性疟重组多价表位疫苗的候选抗原表位.
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人突触相关蛋白抗原表位分析及多克隆抗体的制备
目的泡沫化细胞差异表达基因FRG4经生物信息学分析,与人突触相关蛋白基因有很高同源性,经联机检索,有关突触相关蛋白的研究很少,与脂蛋白代谢、泡沫细胞形成和凋亡的关系没有报道.本文在对泡沫化相关基因FRG4分析的基础上,利用计算机软件进行抗原表位分析,制备特异的抗人突触相关蛋白的多克隆抗体,为进一步深入研究其表达和功能提供条件.方法与结果①选取抗原多肽:利用ExPASy软件和BioEdit软件对FRG4 cDNA序列进行亲水性分析,预测其二级结构;使用Lasergene99软件预测其抗原决定族;根据亲水性、二级结构、偶联难易及实验难度选取抗原13肽PKLVKEEVFWRNY.②多肽合成及交联:采用美国ABI公司的多肽自动合成仪,以固相合成法合成,合成产物经高效液相色谱纯化检测,纯度达到90%以上;抗原多肽与血兰蛋白用BDB法交联,与不完全弗氏佐剂等体积混合包被.③动物免疫:多点皮下注射抗原免疫新西兰兔,每两周强化免疫一次,第三次免疫后10天取耳血测抗体效价(ELISA法).④抗血清收获及检测:第四次免疫后第十至十四天经颈动脉放血,分离抗血清,冷冻抽干,-20℃保存.高效液相色谱检测显示抗体纯度达82.79%,抗体滴度为1∶16 000,免疫印迹方法检测在40 kDa处有一条带,与软件分析结果相符合.结论制备了高效的免抗人突触相关蛋白多克隆抗体.
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人乳头瘤病毒16L1-E7蛋白的原核表达及分析纯化研究
目的 采用基于抗原表位分析对人乳头瘤病毒16L1-E7蛋白的原核表达和纯化进行分析,为相关疫苗的研究提供借鉴.方法 将pET-32a/16L1-E7重组质粒转化BL21大肠杆菌,IPTG诱导16L1-E7蛋白表达,并对表达蛋白纯化后进行抗原特异性鉴定.结果 重组质粒扩增后检测条带单一,菌落PCR和酶切片段位置一致;经0.1 mmol·L-1的IPTG诱导后重组质粒泳道目标蛋白表达明显增多,且抗原特异性好.结论 成功诱导pET-32a/16L1-E7重组质粒表达并进行了纯化,获得了抗原特异性较好的目标蛋白.
