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伊氏锥虫微管结合蛋白p15基因的分子克隆与表达
根据报道的布氏锥虫(Trypanosoma brucei)微管结合蛋白p15(Tb-MAP p15)基因及其3'非翻译区保守序列设计引物,采用PCR法从伊氏锥虫云南水牛株(Trypanosoma evansi stock YNB)基因组DNA中克隆得到伊氏锥虫微管结合蛋白p15(Te-MAP p15)基因.克隆片段长273 bp,编码90个氨基酸,预测分子量9.0kDa.经同源性比较,所得基因与Tb-MAP p15基因同源率达到94%.抗原性分析Te-MAP p15基因表达的氨基酸序列比T.brucei微管结合蛋白p15多5个,均参与组成其中1个抗原决定簇,并且此抗原决定簇序列形成在蛋白中常作为识别位点的α螺旋.将该基因亚克隆到pGEX-6P-1原核表达载体,转化大肠杆菌E.coli RS21宿主菌,经IPTG诱导,可成功表达.重组融合蛋白大小为35 kDa,与预期大小一致,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定为重组伊氏锥虫微管结合p15蛋白.
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狂犬病病毒N、G两种蛋白在间接ELISA方法中的应用比较
目的 比较狂犬病N、G两种蛋白检测抗体效果.方法 本研究先通过比较pET-32a(+)和pGEX-6P-1两种载体表达的狂犬病病毒G蛋白和N蛋白,采用碳酸盐纯化表达量高的两种蛋白,再以纯化的抗原用于检测93份免疫犬血清.结果 (1)以pGEX-6P-1为载体的N、G两种蛋白表达量较高.(2)碳酸盐包被液可以得到纯度较高的蛋白.(3)间接ELISA检测93份抗体,其中56份G蛋白高于N蛋白,37份N蛋白高于G蛋白.(4)血清样本检测结果都为阳性,表明免疫效果良好.结论 针对N、G两种蛋白的抗体在动物体内出现时间不同,哪种抗体出现的早,有待于我们进一步研究.
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转录因子CSL-GST融合蛋白表达载体的构建及其表达纯化
目的 构建转录因子CSL的GST原核表达载体pGEX-6p-1-CSL,并检测其在原核生物大肠杆菌中的表达.方法 通过反转录及聚合酶链反应从人胰腺癌细胞系Hpac细胞中获得编码CSL的cDNA,定向克隆至C端带GST蛋白标签序列的原核表达载体pGEX-6p-1中,原核表达的GST-CSL蛋白经Gluta-thione-Sepharose 4B和PreScission蛋白酶纯化后用凝胶迁移实验分析其活性.结果 pGEX-6p-1-CSL经原核表达及纯化后得到了纯化的CSL蛋白.结论 成功构建了转录因子CSL的GST原核表达载体pGEX-6p-1-CSL.
