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长角血蜱唾液腺Apyrase的生物学特性和功能的研究
长角血蜱在吸血时,其唾液腺中的apyrase可明显地抑制由ADP所诱导的血小板聚集反应,并呈剂量反应关系,1/2对唾液腺可以完全抑制血小板的聚集反应.通过apyrase的动力学、HPLC分子筛、等电聚焦电泳和温度敏感性实验证明,水解ATP和ADP并不是ATP酶、ADP酶或几种酶共同作用的结果,而是一种酶即apyrase的作用结果.Apyrase对Ca2+具有依赖性.而Mg2+、Zn2+、Mn2+对之影响较小,Hg2+和EDTA是apyrase的抑制剂.吸血对蜱唾液腺apyrase活性影响较大,吸血6天时其活性大,吸血后活力明显下降.Apyrase与哺乳动物的5′-核苷酸酶相似,它是一种糖基-磷脂酰肌醇(GPI)膜锚结构蛋白.
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白纹伊蚊唾液抗血小板凝集因子Apyrase基因片段的克隆测序
抗血小板凝集因子Apyrase是吸血昆虫唾液的重要功能因子,能水解被吸血宿主血液中血小板释放的ATP、ADP而抑制血小板凝集,以利吸血过程的顺利进行.本研究针对我国的白纹伊蚊,用兼并引物PCR法扩增了抗血小板凝集因子Apyrase的基因片断,并克隆入T载体进行了测序,经Clastal比较发现与埃及伊蚊相应序列有很高的同源性,为进一步的研究打下基础 .
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志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的表达、纯化及多克隆抗体制备
目的:克隆编码志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的基因phoN2并实现表达,纯化后免疫BALB/c小鼠制备鼠抗Apyrase的多克隆抗体,并对多克隆抗体进行评价.方法:通过PCR扩增的志贺菌5a M90T中的基因phoN2克隆至表达载体pET24a中,将重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,进行IPTG诱导表达并纯化Apyrase-HIS融合蛋白.以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,制备该蛋白的多抗.Western blot、ELISA、免疫荧光鉴定获得的抗血清.结果:成功构建了原核表达载体pET24 a-Apyrase,经诱导表达出相对分子量为28 kD的融合蛋白,用纯化的融合蛋白作为抗原免疫小鼠制备的多克隆抗体,通过Western blot、ELISA、免疫荧光法证明多克隆抗体制备成功.结论:成功制备了志贺菌福氏5a特异性的鼠多克隆抗体,为进一步研究Apyrase蛋白在志贺菌福氏5a M90T中的表达、定位及志贺菌福氏5a M90T的快速检测奠定了基础.
关键词： 志贺菌福氏5a M90T apyrase 多克隆抗体
