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Dicer蛋白在RNA干涉中的作用研究进展
近年来,对功能基因组的研究使人们对基因功能的认识不断深入.后基因时代的来临,又使基因功能研究备受瞩目.RNA干涉对基因表达的抑制为我们提供了新的研究工具.RNA干涉(RNAi)是将双链RNA(dsRNA)导入细胞引起特异基因mRNA降解的一种细胞反应过程.它是转录后基因沉寂(PTGS)的一种.本文简要介绍RNAi的发生机制及该过程中重要分子Dicer的研究进展.
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白纹伊蚊AGO2和Dcr-2基因片段克隆及各发育期转录水平分析
目的 克隆白纹伊蚊(Aedes albopictus )RNA干扰通路相关AGO2和Dcr-2基因片段,并分析该蚊种不同发育阶段这2个基因片段的转录水平.方法 根据埃及伊蚊(Ae.aegypti) AGO2和Dcr-2蛋白的氨基酸序列保守区设计简并引物,经RT-PCR从白纹伊蚊雌蚊总RNA中分别扩增AGO2和Dcr-2 cDNA,并与载体pMD18-T连接,转染大肠埃希菌(E.coli)后,筛选阳性克隆,测序并做Blastx分析.根据获得的白纹伊蚊AGO2和Dcr-2基因片段设计特异性引物,采用半定量RT-PCR分析白纹伊蚊卵、Ⅰ/Ⅱ龄幼虫、Ⅲ/Ⅳ龄幼虫、蛹、雄蚊和雌蚊中这2个基因的mRNA水平.结果 获得的AGO2和Dccr-2 cDNA片段大小分别为326bp和491bp,登录号分别为JQ764670和JQ764671.Blastx分析结果显示,该2个序列编码的氨基酸序列与埃及伊蚊的AGO2和白纹伊蚊的Dcr-2氨基酸序列的同源性分别为91％和98％.AGO2和Dcr-2基因在白纹伊蚊不同发育阶段中均有转录,于雌蚊中的mRNA水平高,分别为雄蚊中mRNA的3.1倍和15.5倍,显著高于其他各阶段的mRNA水平(P＜0.05).结论 获得了白纹伊蚊AGO2和Dcr-2基因部分cDNA片段,并发现这2个基因在雌蚊中转录水平高.
